T—DNA插入失活技术是目前使用最为广泛的植物基因敲除手段,该技术利用农杆菌T—DNA介导转化,将一段带有报告基因的DNA序列整合到植物基因组DNA上,如果这段DNA插入到靶基因(待敲除基因)内部或附近,就会导致靶基因失活。回答下列问题:
(1)转化是指 目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。使用T—DNA介导转化的原因是 T—DNA能转移到被侵染的细胞,并整合到该细胞的染色体DNA上T—DNA能转移到被侵染的细胞,并整合到该细胞的染色体DNA上。
(2)T—DNA在植物基因组中会发生随机整合,可利用PCR技术进行鉴定。图1为靶基因(共900bp)部分碱基序列,经基因敲除处理后得到的三种植株的靶基因PCR扩增产物的电泳结果如图2。

①PCR时应加入依据靶基因序列设计的两种引物,请写出引物的序列 GACCTG、CAATCCGACCTG、CAATCC(每个序列写出6个碱基即可)。除上述两种引物外还应加入依据 报告基因报告基因序列设计的一种引物,目的是 确定含报告基因的DNA序列是否插入到靶基因中确定含报告基因的DNA序列是否插入到靶基因中。
②已知目标植物为二倍体,分析出现图2中B种情况的原因是 将一对靶基因中的一个基因敲除将一对靶基因中的一个基因敲除。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程;T—DNA能转移到被侵染的细胞,并整合到该细胞的染色体DNA上;GACCTG、CAATCC;报告基因;确定含报告基因的DNA序列是否插入到靶基因中;将一对靶基因中的一个基因敲除
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:10引用:1难度:0.7
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