研究人员从麻疯树油中筛选出能产生脂肪酶（LA）的细菌，经诱变后获得两突变体菌株。突变体1菌株产生的酶LA1可耐高温，突变体2菌株产生的酶LA2具有高催化效率，且LA1基因和LA2基因具有93%的同源性。研究人员期望采用PCR技术通过基因重组的方法优化基因序列，获得更适于高效生产的酶。回答下列问题。
（1）采用PCR技术扩增LA1时，除模板、原料、酶、缓冲液等条件外，还需加入引物，引物的作用是使DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸使DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
（2）LA1基因的序列如图1所示，若只使用1种引物，其他条件无误，PCR后只合成出了与模板b相同的单链。该实验使用的引物序列5'-CTCCGATGGCGCATGCTCCGATGGCGCATG-3'（写出引物对应的15个碱基），若扩增图中序列时引物选择正确，PCR操作过程没有问题，但对产物进行电泳时，发现除了目标序列外还有很多非特异性条带，请分析出现此情况的原因 退火（复性）温度过低、引物特异性不高退火（复性）温度过低、引物特异性不高（2点即可）。
（3）传统的基因重组可采用限制酶切再用DNA连接酶连接的方式获得重组的基因，但存在工作量大、效率低等缺点，交错延伸PCR技术可以解决以上问题。此技术采用LA1、LA2均做模板，具体流程如图2（仅显示其中一条链延伸情况）。经过过程①80轮交错循环后，可获得PCR混合产物，请比较PCR过程中的第三个步骤中，交错延伸PCR与普通PCR技术的区别是 每轮扩增仅延伸一小段，经过多轮“产物一模板”交替结合、延伸，最终扩增出交错重组基因片段混合产物每轮扩增仅延伸一小段，经过多轮“产物一模板”交替结合、延伸，最终扩增出交错重组基因片段混合产物。最终获得的混合PCR产物中，DNA分子的种类数为 dd（填字母）。
a.4种
b.16种
c.64种
d.无法计算
获得的重组LA基因中，同时具有LA1和LA2基因序列的原因是 第一轮以LA1（LA2）为模板合成的子链片段在第2轮复制时作为引物结合到LA2（LA1）的模板上继续合成子链，经多轮交错循环扩增，可以使产物同时含有两种基因的序列第一轮以LA1（LA2）为模板合成的子链片段在第2轮复制时作为引物结合到LA2（LA1）的模板上继续合成子链，经多轮交错循环扩增，可以使产物同时含有两种基因的序列。
（4）将所获得的PCR混合产物插入PM质粒，图中A为启动子、B为氯霉素抗性基因cat,C为终止子，D为asd-突变基因（asd基因是编码细菌二氨基庚二酸（DAP）合成途径的关键酶，DAP是细菌细胞壁的主要成分，asd基因缺失时，将导致菌株生长对DAP依赖），E为复制原点，箭头处指不同限制酶的识别位点。为使目的基因定向插入PM质粒，交错延伸的PCR过程引物的5'需引入 XhoⅠXhoⅠ酶的识别序列。为便于目的基因的检测和鉴定，作为受体菌应采用asd基因 正常表达正常表达的受体菌，能从含有PM质粒、重组PM质粒的受体菌中能将含有重组PM质粒的受体菌筛选的选择思路为 将正常培养基上分离出的受体菌单菌落，平移印制到含氯霉素的培养基上，在含氯霉素的培养基上无法生长的菌落对应的原菌落即为含有重组PM质粒的受体菌将正常培养基上分离出的受体菌单菌落，平移印制到含氯霉素的培养基上，在含氯霉素的培养基上无法生长的菌落对应的原菌落即为含有重组PM质粒的受体菌。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因工程的操作过程综合．
【答案】使DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸；CTCCGATGGCGCATG；退火（复性）温度过低、引物特异性不高；每轮扩增仅延伸一小段，经过多轮“产物一模板”交替结合、延伸，最终扩增出交错重组基因片段混合产物；d；第一轮以LA1（LA2）为模板合成的子链片段在第2轮复制时作为引物结合到LA2（LA1）的模板上继续合成子链，经多轮交错循环扩增，可以使产物同时含有两种基因的序列；XhoⅠ；正常表达；将正常培养基上分离出的受体菌单菌落，平移印制到含氯霉素的培养基上，在含氯霉素的培养基上无法生长的菌落对应的原菌落即为含有重组PM质粒的受体菌
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/26 11:36:51组卷：58引用：2难度：0.5
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
