为加速对乙肝的控制，经国务院批准，2002年起我国将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫。第一代乙肝疫苗是血源性乙肝疫苗，但该类疫苗产量低，有一定的安全隐患。随着技术的进步，人们开发出了第二代乙肝疫苗一基因工程乙肝疫苗。请回答下列问题：
（1）基因工程乙肝疫苗是通过构建含有乙肝表面抗原的重组质粒后再转入酵母细胞，从而制备出乙肝病毒表面的有效蛋白。其中的目的基因是

乙肝病毒表面的有效蛋白基因

乙肝病毒表面的有效蛋白基因

，该目的基因的序列已经测定出来，且乙肝病毒表面的有效蛋白分子较小，所以可利用已知的基因序列通过

人工合成的方法

人工合成的方法

获取目的基因。
（2）在构建基因表达载体时常用的两种工具酶是

限制酶、DNA连接酶

限制酶、DNA连接酶

，操作过程中形成3种连接体，导致这种结果的原因很可能是

目的基因和质粒自身环化导致

目的基因和质粒自身环化导致

。
（3）将表达载体导入酵母菌时，与大肠杆菌相似，要用

氯化钙

氯化钙

处理，使受体细胞成为

感受态

感受态

细胞。
（4）筛选和鉴定经转化处理的酵母菌细胞时，要确定是否生产出乙肝疫苗，需要通过

抗原-抗体杂交方法

抗原-抗体杂交方法

（方法）进行检测。