重叠延伸PCR技术是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来的技术，可通过定点诱变在体外改造DNA分子，并将改造后的目的基因导入质粒构建目的基因表达载体。
（1）如图所示的重叠延伸PCR技术中，PCR1的引物是 引物A、引物C引物A、引物C。PCR4可获得大量定点诱变目的基因，此时的引物为 引物C、引物D引物C、引物D。PCR3时模板DNA不能选择DNA分子③的原因是 子链的延伸方向只能从5’→3'，以DNA分子③作模板时子链不能延伸子链的延伸方向只能从5’→3'，以DNA分子③作模板时子链不能延伸。
（2）为使重叠延伸PCR技术改造后的目的基因（该基因序列不含图中限制酶的识别序列）能与载体正确连接，PCR4时，应在基因上、下游引物的 5′5′端分别添加限制酶 KpnⅠ、EcoRⅠKpnⅠ、EcoRⅠ的酶切位点。
（3）将目的基因、质粒及大肠杆菌混合，温育一段时间后涂在含四环素的平板上培养，一段时间后平板上长出菌落。这些菌落的菌体内 不一定不一定（填“一定”、“不一定”）含有目的基因，理由是 含有空白质粒的大肠杆菌也能在该培养上生长含有空白质粒的大肠杆菌也能在该培养上生长。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因工程的操作过程综合．
【答案】引物A、引物C；引物C、引物D；子链的延伸方向只能从5’→3'，以DNA分子③作模板时子链不能延伸；5′；KpnⅠ、EcoRⅠ；不一定；含有空白质粒的大肠杆菌也能在该培养上生长
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：50引用：2难度：0.7
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
