角蛋白酶（KerA）是降解角蛋白的酶类，在饲料工业中具有较大的应用前景，但天然菌株产酶量低限制了其推广应用。为了获得高效表达的KerA工程菌，研究者分别构建了大肠杆菌和毕赤酵母工程菌，并实现了异源表达。图1为含KerA基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均为限制酶，Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题：
（1）为了获取KerA基因，从天然菌株中提取相应的DNA片段，再通过PCR技术大量扩增，PCR技术的原理 DNA双链复制DNA双链复制，前提是 要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。
（2）为了形成合适的重组质粒，应该选用 BamHⅠBamHⅠ和 XhoⅠXhoⅠ限制酶切割外源DNA和质粒DNA。
（3）重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图1所获得的重组质粒分析，应选择具有 在卡那霉素的培养基上不能生长（在四环素的培养基上生长不生长）在卡那霉素的培养基上不能生长（在四环素的培养基上生长不生长）特点的细胞作为受体细胞，才有利于后续的筛选。
（4）将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。图2是KerA基因重组质粒的“工程菌”的筛选示意图：图中的 BB和 DD（选用“A/B/C/D/E”字母作答）菌落为含有目的基因的“工程菌”。
（5）KerA基因在大肠杆菌和毕赤酵母工程菌是否能实现异源表达，需要用抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交技术检测，若在二者细胞中都能实现表达，从分子水平上分析原因是 抗原-抗体杂交技术 共用一套遗传密码抗原-抗体杂交技术 共用一套遗传密码，并且它们体内转录和翻译的过程或机制相同。但经研究发现，只有毕赤酵母工程菌表达合成的KerA可直接投入使用，分析其原因是 毕赤酵母是具有内质网、高尔基体的真核生物，而大肠杆菌则没有，前者能将翻译出来的KerA肽链加工成具有活性（或空间结构）的蛋白质毕赤酵母是具有内质网、高尔基体的真核生物，而大肠杆菌则没有，前者能将翻译出来的KerA肽链加工成具有活性（或空间结构）的蛋白质。
（6）KerA在60℃以上时热稳定性差，限制了该酶的应用范围，研究人员在KerA的末端插入半胱氨酸，这不仅对酶活性影响小，且大大提高了其热稳定性。其运用到的这种现代生物技术为 蛋白质工程蛋白质工程。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA双链复制；要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；BamHⅠ；XhoⅠ；在卡那霉素的培养基上不能生长（在四环素的培养基上生长不生长）；B；D；抗原-抗体杂交；抗原-抗体杂交技术 共用一套遗传密码；毕赤酵母是具有内质网、高尔基体的真核生物，而大肠杆菌则没有，前者能将翻译出来的KerA肽链加工成具有活性（或空间结构）的蛋白质；蛋白质工程
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：180引用：2难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
