生物工程
绿色荧光蛋白（GFP）是一种在当今生命科学和医学研究中被广泛使用的示踪物。基于GFP的光学成像技术使人们可以直接观察到从微观到宏观各个层次上丰富多彩的生命现象。最早普瑞泽成功克隆了绿色荧光蛋白基因（sGFP），随后查尔菲实现了sGFP在大肠杆菌内的表达，大肠杆菌发出了绿色荧光。
（1）sGFP的

碱基序列

碱基序列

中储存着决定GFP的遗传信息。sGFP在细胞内的表达过程中，需要下列选项中的

BCD

BCD

。（多选）
A．脱氧核苷三磷酸
B．RNA聚合酶
C．氨基酸
D．tRNA
（2）通过PCR可在短时间内大量获取sGFP。PCR必须要先人工化学合成引物。若有一条引物的部分碱基序列是5'-GCTGCACGT-3'，则与该引物结合的模板DNA链上相应的碱基序列是5'-

ACGTGCAGC

ACGTGCAGC

-3'。已知该条引物结合模板DNA的位置和扩增方向，请在图1方框中用箭头标出另一条引物的位置和扩增方向。

大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育转基因大丽轮枝菌，主要过程如图2所示（图中a链和b链分别是相应基因转录模板链）。
（3）据图所示，过程①处理后，sGFP一端a链的黏性末端碱基序列是

A

A

（5'→3'）。（单选）
A．GATC
B．CTAG
C．AGCT
D．TCGA
（4）图中过程②需加入

DNA连接

DNA连接

酶，从而获得重组质粒。对获得的重组质粒用BamHⅠ和HindⅡ联合酶切，再进行电泳，得到的电泳条带应是

C

C

。（单选）

（5）重组质粒导入农杆菌后，需对农杆菌进行培养和筛选，在此过程中需用到的仪器是

①③

①③

。（编号选填）

（6）农杆菌转染大丽轮枝菌的孢子细胞后，孢子细胞也需进行培养和筛选。请简述对农杆菌和大丽轮枝菌的筛选方法并说明原因。

农杆菌本身不含有潮霉素抗性基因，而重组质粒中有潮霉素抗性基因。若农杆菌中导入了重组质粒，则对潮霉素有抗性，否则就没有。因此将农杆菌置于含潮霉素的培养基中培养，能形成菌落的就是成功导入重组质粒的农杆菌。大丽轮枝菌本身没有绿色荧光蛋白基因，若农杆菌成功转染，则大丽轮枝菌就能表达出绿色荧光蛋白。因此将大丽轮枝菌的孢子细胞置于真菌培养基上培养，检测菌落中绿色荧光的有无，就筛选出能表达绿色荧光蛋白的大丽轮枝菌

农杆菌本身不含有潮霉素抗性基因，而重组质粒中有潮霉素抗性基因。若农杆菌中导入了重组质粒，则对潮霉素有抗性，否则就没有。因此将农杆菌置于含潮霉素的培养基中培养，能形成菌落的就是成功导入重组质粒的农杆菌。大丽轮枝菌本身没有绿色荧光蛋白基因，若农杆菌成功转染，则大丽轮枝菌就能表达出绿色荧光蛋白。因此将大丽轮枝菌的孢子细胞置于真菌培养基上培养，检测菌落中绿色荧光的有无，就筛选出能表达绿色荧光蛋白的大丽轮枝菌

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