CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，Cas9基因表达的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA（SgRNA）引导下，切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如图所示。
回答下列问题。
（1）过程①中，为构建CRISPR/Cas9重组质粒，需对含有特定sgRNA编码序列的DNA进行酶切处理后，将其插入到经相同酶切处理过的质粒上，插入时所需要的酶是 DNA连接酶DNA连接酶，切合和插入所用的限制酶种类一般应相同，原因是 为了便于质粒和目的基因连接为了便于质粒和目的基因连接。
（2）过程②中，将重组质粒导入大肠杆菌细胞的方法是 感受态细胞法/Ca2+处理法感受态细胞法/Ca2+处理法。
（3）过程③～⑤中，SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体中的SgRNA可识别并与目标DNA序列特异性结合，二者结合的原理是 碱基互补配对碱基互补配对。随后，Cas9蛋白可切割 目标基因目标基因序列。
（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除某DNA片段（记为甲）中长度为1200bp的基因（记为乙），在DNA水平上判断基因敲除是否成功所采用的方法是 DNA分子杂交DNA分子杂交，大致过程及成功敲除的判断依据是 用乙制作的探针与甲杂交，若无杂交带，则敲除成功用乙制作的探针与甲杂交，若无杂交带，则敲除成功。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA连接酶；为了便于质粒和目的基因连接；感受态细胞法/Ca2+处理法；碱基互补配对；目标基因；DNA分子杂交；用乙制作的探针与甲杂交，若无杂交带，则敲除成功
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：5引用：1难度：0.5
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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