许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ'基因，其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色．基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图．请据图回答：
（1）基因工程中，构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用．
（2）限制酶EcoRI的识别序列和切点 是-G′AATTC-，Sma I的识别序列和切点是-CCC′GGG-．图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是-TTAA-TTAA，连接过程中需要的基本工具是DNA连接酶DNA连接酶．
（3）转化过程中，大肠杆菌应先用Ca2+Ca2+处理，使其处于能吸收周围 DNA的状态．
（4）菌落颜色为白色的是菌落③菌落③，原因是lacZ'标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出3-半乳糖苷酶，故菌落为白色lacZ'标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出3-半乳糖苷酶，故菌落为白色．
（5）菌落③中的目的基因是否能表达，可采用的检测办法是抗原一抗体杂交抗原一抗体杂交．
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用；-TTAA；DNA连接酶；Ca2+；菌落③；lacZ'标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出3-半乳糖苷酶，故菌落为白色；抗原一抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：26引用：4难度：0.5
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