Cre酶是一种重组酶,LoxP是能被Cre酶识别的特异DNA序列。Cre/LoxP重组酶系统能够实现特异位点的基因敲除、基因插入等操作。
(1)一般而言,当一条DNA链上存在两个相同的LoxP序列且方向相同时,Cre酶能有效切除两个位点间的DNA序列,如图1所示。

①Cre酶与限制酶的功能类似,能将特定部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键磷酸二酯键断开。
②在无Cre酶存在的细胞中,转录终止信号序列抑制下游GFP基因起作用,无法发出荧光。若细胞中含有Cre酶,Cre酶就会 切除转录终止信号序列切除转录终止信号序列,GFP基因就会 转录和翻译(或“表达“)转录和翻译(或“表达“),合成绿色荧光蛋白。
(2)当细胞中存在多对Cre酶识别位点和荧光基因时,只有在启动子之后且与启动子相邻的荧光蛋白基因才会表达,借助大脑成像技术,通过荧光蛋白“点亮”大脑内的神经元,小鼠不同的脑组织细胞就会呈现不同的颜色,出现“脑彩虹”。
①研究者利用 限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶构建了含有荧光蛋白基因和Cre酶识别序列的基因表达载体(如图2),利用 显微注射显微注射法将其导入小鼠细胞中,进而培育出转基因小鼠。
②若该小鼠脑细胞中不存在Cre酶,小鼠脑组织呈现的色彩为 绿色绿色。
③若该小鼠脑细胞中存在Cre酶时,该小鼠一个脑细胞的色彩为 绿色或红色或黄色或蓝色绿色或红色或黄色或蓝色。
(3)两个LoxP序列位于一条DNA链上且方向相反时,Cre酶能诱导两个LoxP位点间的序列翻转。请在图3中画出仅通过序列翻转就能在脑组织中同时呈现四种颜色的基因表达载体模式图(用最少的LoxP序列)。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】磷酸二酯键;切除转录终止信号序列;转录和翻译(或“表达“);限制酶和DNA连接;显微注射;绿色;绿色或红色或黄色或蓝色
【解答】
【点评】
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