URA3基因位于酵母菌5号染色体上,编码的酶参与酵母菌尿嘧啶核苷酸的合成。科研人员利用基因工程敲除酵母菌中的URA3基因,以获得尿嘧啶营养缺陷型酵母菌。敲除过程中利用了PCR技术,流程如图所示并回答下列问题:

(1)在PCR过程中,引物的设计是关键。除图示引物A1和B2外,还需设计引物A2和B1,才能通过步骤①和②分别获得A、B片段。引物A2和B1均由40个核苷酸组成,据图分析引物B1的5'端前20个碱基应与 CC互补,后20个碱基应与 BB互补。(填下列选项)
A.A片段的模板链
B.B片段的模板链
C.引物A2
D.引物B2
(2)在不同阶段需要添加不同引物才能获得正确的扩增产物。据图分析步骤③和④选用的引物种类(“+”代表选用,“—”代表不选用)
引物种类 步骤 |
引物A1 | 引物A2 | 引物B1 | 引物B2 |
① | + | + | — | — |
② | — | — | + | + |
③ | ||||
④ |
2
2
次复制。(4)从获得的转基因酵母菌中筛选出了多株尿嘧啶营养缺陷型,现需验证这些菌株是因URA3基因缺失而导致的。选择实验材料写出实验设计思路。
实验材料:转基因酵母菌、完全培养基、尿嘧啶缺陷型培养基、含URA3基因的重组质粒、不含URA3基因的空质粒实验设计思路:
将转基因酵母菌随机分为两组,一组导入含有URA3基因的重组载体,一组导入不含URA3基因的空质粒,再将两组酵母菌接种到尿嘧啶缺陷型培养基,观察生长的状况
将转基因酵母菌随机分为两组,一组导入含有URA3基因的重组载体,一组导入不含URA3基因的空质粒,再将两组酵母菌接种到尿嘧啶缺陷型培养基,观察生长的状况
。【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定;基因工程的操作过程综合.
【答案】C;B;2;将转基因酵母菌随机分为两组,一组导入含有URA3基因的重组载体,一组导入不含URA3基因的空质粒,再将两组酵母菌接种到尿嘧啶缺陷型培养基,观察生长的状况
【解答】
【点评】
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