细胞生命活动的稳态离不开基因表达的调控，mRNA降解是重要调控方式之一。
（1）在真核细胞的细胞核中，RNA聚合RNA聚合酶以DNA为模板合成mRNA．mRNA的5′端在相关酶作用下形成帽子结构，保护mRNA使其不被降解。细胞质中D酶可催化脱去5′端帽子结构，降解mRNA，导致其无法翻译翻译出相关蛋白质，进而实现基因表达调控。
（2）脱帽降解主要在细胞质中的特定部位--P小体中进行，D酶是定位在P小体中最重要的酶。科研人员首先构建D酶过量表达细胞。
①科研人员用Xho1、SalIXho1、SalI酶分别切割质粒和含融合基因的DNA片段，连接后构建图1所示的表达载体。将表达载体转入Hela细胞（癌细胞）中，获得D酶过量表达细胞，另一组Hela细胞转入空质粒（不含融合基因的质粒）空质粒（不含融合基因的质粒）作为对照组。在含5%二氧化碳二氧化碳的恒温培养箱中培养两组Hela细胞。
②通过测定并比较两组细胞的D酶基因表达量，可确定D酶过量表达细胞是否制备成功。请写出从RNA和蛋白质水平检测两组细胞中D酶量的思路。
RNA水平：分别提取两组细胞总RNA，逆转录形成cDNA，用D酶基因的特异性序列设计引物，通过PCR技术，测定并比较两组细胞D-mRNA量（分别提取两组细胞总RNA，用D酶基因的特异性序列设计基因探针，测定并比较两组细胞D-mRNA量）分别提取两组细胞总RNA，逆转录形成cDNA，用D酶基因的特异性序列设计引物，通过PCR技术，测定并比较两组细胞D-mRNA量（分别提取两组细胞总RNA，用D酶基因的特异性序列设计基因探针，测定并比较两组细胞D-mRNA量）。
蛋白质水平：测定两组细胞中红色荧光的量来反映D酶的量测定两组细胞中红色荧光的量来反映D酶的量。
（3）为研究D酶过量表达是否会促进P小体的形成，科研人员得到图2所示荧光测定结果。
①D酶过量表达的Hela细胞荧光结果表明，D酶主要分布在细胞质细胞质中。
②比较两组荧光结果，推测D过量表达会促进P小体的形成D过量表达会促进P小体的形成。
（4）研究发现细菌mRNA虽没有帽子结构，但其与mRNA降解相关的R酶也具有脱帽酶活性，可推测脱帽活性可能出现在真核生物mRNA的帽子结构出现之前之前；从进化的角度推测，D酶和R酶的氨基酸氨基酸序列具有一定的同源性。
【考点】遗传信息的转录和翻译．
【答案】RNA聚合；翻译；Xho1、SalI；空质粒（不含融合基因的质粒）；二氧化碳；分别提取两组细胞总RNA，逆转录形成cDNA，用D酶基因的特异性序列设计引物，通过PCR技术，测定并比较两组细胞D-mRNA量（分别提取两组细胞总RNA，用D酶基因的特异性序列设计基因探针，测定并比较两组细胞D-mRNA量）；测定两组细胞中红色荧光的量来反映D酶的量；细胞质；D过量表达会促进P小体的形成；之前；氨基酸
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：36引用：2难度：0.7
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