赤霉素与其受体GID结合后,可以促进植物茎秆伸长。蓝光能够激活蓝光受体CRY,抑制赤霉素的作用,为探究该机理,研究者分别构建了含有His-CRY和GST-GID融合基因的表达载体,表达出相应的融合蛋白。His和GST均为短肽,它们与其他蛋白形成的融合蛋白能与His或GST抗体结合,且不影响其他蛋白的结构和功能。

(1)构建含上述融合基因的表达载体。
①结合图1分析,欲使His短肽连在CRY的氨基酸序列前面(氨基端),则应在 F引物F引物(填“F引物”或“R引物”)的5′端加上His短肽的编码序列。
②为使融合基因能与载体相连接,还需在F引物和R引物上添加相应的酶切位点序列,该序列应该位于His短肽编码序列的 5′5′(填“5′”或“3′”)端。
③用同样的方法扩增CST-GID融合基因,并构建相关表达载体。
(2)将两个表达载体同时导入拟南芥细胞,一段时间后裂解细胞,将含有His抗体的磁珠加入裂解液中,充分孵育后收集磁珠,将磁珠上的蛋白(磁珠蛋白)分离下来,进行抗原抗体杂交,结果如图2。
①对细胞裂解液蛋白进行抗原—抗体杂交的目的是确定His-CRY和GST-GID这两个融合基因在拟南芥细胞已正常 表达表达。对磁珠蛋白进行His抗体检测的目的是确定磁珠上的His抗体可以结合 His短肽His短肽。
②图示结果说明,蓝光的作用机理是光激活CRY后,CRY与 赤霉素受体GID赤霉素受体GID结合,使赤霉素无法发挥作用,从而抑制赤霉素的作用。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】F引物;5′;表达;His短肽;赤霉素受体GID
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:19引用:1难度:0.5
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