草甘膦是一种非选择性除草剂，杀死杂草的同时也杀死农作物。它与植物体内的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）结构相似，可与PEP竞争结合EPSP合酶，阻止PEP转化，影响植物细胞正常代谢。我国科学家从草甘膦施用土壤中的微生物体内获取草甘膦抗性基因GR29，并将其导入大豆体细胞中获得抗草甘膦的转基因大豆。
（1）结合上述信息推测GR29发挥抗草甘膦作用的途径可能是

GR29表达的产物阻止草甘膦与PEP竞争结合EPSP合酶

GR29表达的产物阻止草甘膦与PEP竞争结合EPSP合酶

。
（2）将GR29导入大豆细胞前，需将其与酶切后的质粒P连接获得

重组质粒

重组质粒

。因GR29基因序列两端无所需的限制酶切位点，据图1推测扩增该基因时需向引物1和引物2的

5'端

5'端

（5'端/3'端）加上

PstI和XhoI

PstI和XhoI

限制酶的识别序列。

（3）荧光定量PCR技术可实现对转基因大豆中目的基因的定量检测。在PCR反应体系中，加入的荧光探针与模板DNA（目的基因）的某条链互补结合，当合成的子链延伸至探针处，探针被酶切降解，荧光监测系统就会接收到荧光信号，具体原理如图2所示。
①可通过检测

荧光

荧光

判定待测植物中是否含有模板DNA，且荧光达到某一特定强度所需的循环次数越

少

少

，模板DNA含量越高。
②通过上述技术定量检测目的基因，需从设计的多对引物和多种探针中选择特异性最好的组合，为此需进行多组实验，每个实验组需向反应体系中加入

a、d、e、f、h

a、d、e、f、h

。（填字母）
a.转基因大豆的DNA模板
b.非转基因大豆DNA模板
c.足量的待测引物
d.定量的待测引物
e.定量的待测荧光探针
f.热稳定DNA聚合酶
g.解旋酶
h.足量的脱氧核苷酸（dNTP）
③预期随时间变化，荧光强度达到一定值后将不再增加，这是由于

DNA复制为半保留复制

DNA复制为半保留复制

。