某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因（AmpR）LacZ基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如下图所示。
注：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。
请根据以上信息回答下列问题。
（1）在第②步中，应怎样选择限制酶？①应选择用相同的限制酶或切割能产生相同末端的限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段；②并且注意限制酶的切割位点不能位于目的基因的内部，以防破坏目的基因；③限制酶也不能破坏质粒的启动子、终止子、标记基因、复制原点等结构①应选择用相同的限制酶或切割能产生相同末端的限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段；②并且注意限制酶的切割位点不能位于目的基因的内部，以防破坏目的基因；③限制酶也不能破坏质粒的启动子、终止子、标记基因、复制原点等结构。
（2）在第③步中，为了使质粒DNA与目的基因能连接，还需要在混合物中加入 DNA连接酶DNA连接酶。
（3）选用含有AmpR和Lacz基因的质粒进行实验有哪些优势？
该质粒便于进行双重筛选，标记基因AmpR基因可用于检测质粒是否导入了大肠杆菌，一般只有导入了质粒的大肠杆菌才能在添加了青霉素的培养基上生长。而由于LacZ基因的效应，这些生长的菌落可能出现两种颜色：含有空质粒（没有连接目的基因的质粒）的大肠杆菌菌落呈蓝色；含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色该质粒便于进行双重筛选，标记基因AmpR基因可用于检测质粒是否导入了大肠杆菌，一般只有导入了质粒的大肠杆菌才能在添加了青霉素的培养基上生长。而由于LacZ基因的效应，这些生长的菌落可能出现两种颜色：含有空质粒（没有连接目的基因的质粒）的大肠杆菌菌落呈蓝色；含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色。
（4）含有重组质粒的大肠杆菌菌落将呈现 白白色，原因是 因为目的基因的插入破坏了LacZ基因的结构，使其不能正常表达形成β-半乳糖苷酶，底物X-gal也就不会被分解因为目的基因的插入破坏了LacZ基因的结构，使其不能正常表达形成β-半乳糖苷酶，底物X-gal也就不会被分解。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】①应选择用相同的限制酶或切割能产生相同末端的限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段；②并且注意限制酶的切割位点不能位于目的基因的内部，以防破坏目的基因；③限制酶也不能破坏质粒的启动子、终止子、标记基因、复制原点等结构；DNA连接酶；该质粒便于进行双重筛选，标记基因AmpR基因可用于检测质粒是否导入了大肠杆菌，一般只有导入了质粒的大肠杆菌才能在添加了青霉素的培养基上生长。而由于LacZ基因的效应，这些生长的菌落可能出现两种颜色：含有空质粒（没有连接目的基因的质粒）的大肠杆菌菌落呈蓝色；含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色；白；因为目的基因的插入破坏了LacZ基因的结构，使其不能正常表达形成β-半乳糖苷酶，底物X-gal也就不会被分解
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/23 20:38:36组卷：17引用：2难度：0.5
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