现代基因编辑CRISPR/Cas9技术可以对生物的DNA序列进行定点切割。将编码Cas9酶和sgRNA的基因作为外源基因构建基因表达载体后，导入受体细胞，可将细胞内某个基因定向敲除，其作用机理如图所示。请回答问题。

（1）sgRNA与Cas9酶是一个功能复合体。如图所示，sgRNA有引导作用，与A基因中部分序列碱基互补配对，Cas9酶在配对区域定点切割，导致A基因发生碱基对

缺失

缺失

，基因丧失功能。sgRNA与Cas9酶的联合作用类似于

限制

限制

酶的作用。如果要获得基因敲除动物个体，应以

受精卵

受精卵

作为受体细胞，用

显微注射

显微注射

法导入CRISPR/Cas9基因表达载体。
（2）研究人员担心基因编辑发生“脱靶效应”，导致其他非目标基因发生突变，我国科学家对此进行了检测。在小鼠受精卵分裂为两个细胞时，向其中一个细胞注入基因编辑工具，之后将此胚胎移植入母鼠子宫，待其发育到14天时，将胚胎取出，把胚胎的细胞全部分散开，分成基因编辑细胞后代和非基因编辑细胞后代两个细胞群，分别提取DNA，测序、比对。结果发现CRISPR/Cas9技术的脱靶率很低，而另一类单碱基突变系统的基因编辑技术脱靶率极高。
①用同一受精卵分裂形成的两个细胞作为处理对象和对照，优点是

这两个细胞的基因序列相同，避免因实验组和对照组细胞原有的基因序列差异掩盖“脱靶效应”

这两个细胞的基因序列相同，避免因实验组和对照组细胞原有的基因序列差异掩盖“脱靶效应”

。
②利用二细胞胚胎分裂产生的子细胞DNA作为测序对象，而不是将实验组细胞和对照组细胞DNA进行PCR扩增后测序，原因是

PCR扩增会产生较多的复制错误，掩盖“脱靶效应”

PCR扩增会产生较多的复制错误，掩盖“脱靶效应”

。
③为方便将基因编辑细胞后代和非基因编辑细胞后代分开，可在构建基因表达载体时

利用某种荧光蛋白基因作为标记基因

利用某种荧光蛋白基因作为标记基因

。
（3）基因编辑的“脱靶效应”可能对被编辑个体带来什么不良影响？

如果脱靶效应发生在原癌基因，可能导致细胞癌变

如果脱靶效应发生在原癌基因，可能导致细胞癌变

。