图示PIJ702是一种常用质粒，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因；mel为黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而三种限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分别只有一处识别序列。回答下列问题。
（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA中特定核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键断裂，切割形成的末端有黏性末端和平末端黏性末端和平末端两种。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，与质粒pIJ702上长度为0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段进行置换，构建重组质粒pZHZ8。通常用两种限制酶切割目的基因和质粒，而不用单酶切的原因是防止目的基因的错误连接（或防止质粒和目的基因的自身环化及目的基因与质粒的反向连接）防止目的基因的错误连接（或防止质粒和目的基因的自身环化及目的基因与质粒的反向连接）。上述两种质粒经限制酶BglⅡ酶切后分别得到长度为5.7kb、6.7kb的DNA片段。由此判断目的基因的片段长度为1.41.4kb。
（3）导入目的基因时，首先用Ca2+处理链霉菌使其成为感受态细胞，再将重组质粒pZHZ8溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下可以促进链霉菌完成转化转化过程。
（4）不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素的固体培养基上生长状况如上表所示。若要筛选导入pZHZ8的链霉菌细胞，所需硫链丝菌素浓度至少应在55μg/mL以上，挑选成功导入pZHZ8的链霉菌的具体方法是根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选。
| 固体培养基中硫链丝菌素浓度（ug/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含质粒的链霉菌生长状况 | +++++ | ++++ | + | - | - |
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】磷酸二酯键；黏性末端和平末端；防止目的基因的错误连接（或防止质粒和目的基因的自身环化及目的基因与质粒的反向连接）；1.4；转化；5；根据导入plJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌菌落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：13引用：1难度：0.7
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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