白僵菌可感染农业害虫，常作为防治害虫的菌剂。由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感且杀死害虫的能力较弱，科研人员对其进行基因工程改造，流程如图所示。
（1）苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白，能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列，科研人员通过人工合成人工合成法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析，将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是NcoI、BamHINcoI、BamHI和DNA连接酶。
（2）重组质粒1和Bar基因（草丁膦抗性基因）各自用XbaI酶处理，得到酶切片段。重组质粒1的酶切片段再用去磷酸化酶处理，使末端游离的磷酸基团脱离，目的是防止重组质粒1酶切片段自身连接重组质粒1酶切片段自身连接。将未用去磷酸化酶处理的Bar基因与重组质粒1连接，获得重组质粒2．获得的重组质粒2的是图中的CC。
（3）将重组质粒2与经Ca2+Ca2+处理过的白僵菌菌液混合进行转化，重组质粒2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有草丁膦草丁膦的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。
（4）提取上述重组白僵菌全部mRNA，加入逆转录逆转录酶，获得cDNA．在获得的产物中加入毒蛋白基因引物进行PCR反应，用以检测毒蛋白基因是否完成了转录转录。
（5）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的死亡害虫数死亡害虫数，以判断重组白僵菌的杀虫效果。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】人工合成；NcoI、BamHI；重组质粒1酶切片段自身连接；C；Ca2+；草丁膦；逆转录；转录；死亡害虫数
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：5引用：3难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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