人乳铁蛋白（hLF）广泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量较高，对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如图，图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neor为新霉素抗性基因，BLC基因为β-乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：
（1）过程①的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板，通过逆转录合成 cDNAcDNA，再通过PCR技术扩增hLF基因。但是过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，这是因为 hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达）hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达），在RT-PCR过程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEBL质粒中。
（2）过程③中pEBL质粒经脂质体介导进入山羊乳腺上皮细胞依据的原理是 生物膜具有一定的流动性生物膜具有一定的流动性。
（3）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入了 pEB质粒或pEBL质粒（或普通质粒或重组质粒）pEB质粒或pEBL质粒（或普通质粒或重组质粒）的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞，观察到 无绿色荧光无绿色荧光现象即为转染成功的细胞。
（4）科研过程中，可以用PCR技术检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了hLF基因或检测 hLF基因是否转录出mRNAhLF基因是否转录出mRNA，还可以用 抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交技术，检测hLF基因是否翻译出人乳铁蛋白。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】cDNA；hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达）；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流动性；pEB质粒或pEBL质粒（或普通质粒或重组质粒）；无绿色荧光；hLF基因是否转录出mRNA；抗原-抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：2引用：1难度：0.5
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
