为探究烟台黑猪SLA-2抗原的呈递规律研究者构建了SLA-2基因的表达载体并将其在改造后的猪肾上皮细胞（sT2细胞）中表达。PCR扩增目的基因的反应体系为：烟台黑猪的基因组、引物A和B、DNA聚合酶、缓冲液和dNTP等；操作流程为：①95℃预处理3 min→②95℃保温30 s→③66℃保温30 s→④72℃保温1 min→⑤操作②-③-④循环35次→⑥保温10 min。构建基因表达载体所用的质粒中，含有的限制酶识别序列如下表所示。
| 限制酶 | EcoRⅠ | NotⅠ | NheⅠ | XbaⅠ | BamHⅠ |
| 识别序列 | 5'-GAATTC-3' | 5'-GCGGCCGC-3' | 5'-GCTAGC-3' | 5'-TCTAGA-3' | 5'-GGATCC-3' |
能够使限制酶切割目的基因，以便于和质粒连接
能够使限制酶切割目的基因，以便于和质粒连接
，加入的位置是引物的 5'端
5'端
（填“3'端”或“5'端”）PCR操作流程中步骤②的目的是 使DNA分子高温变性解旋
使DNA分子高温变性解旋
，步骤③的目的是 使引物与目的基因通过碱基互补配对结合
使引物与目的基因通过碱基互补配对结合
。（2）构建基因表达载体时，应选用的限制酶是
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
。（3）将基因表达载体转染人胚胎上皮细胞，获得携带SLA-2基因和嘌呤霉素抗性基因的病毒表达载体，用后者感染sT2细胞后，再利用含嘌呤霉素培养液筛选出成功导入SLA-2基因的细胞（嘌呤霉素是一种能抑制细胞中蛋白质合成的抗生素）。请设计实验确定用于筛选的嘌呤霉素溶液最低浓度。（求：写出简要思路并预测结果）
将未导入外源基因的sT2细胞在一系列浓度梯度嘌呤霉素的培养液中培养，一段时间后，检测不同浓度溶液中sT2细胞的存活情况。可以杀死所有细胞的最低浓度即为所需
将未导入外源基因的sT2细胞在一系列浓度梯度嘌呤霉素的培养液中培养，一段时间后，检测不同浓度溶液中sT2细胞的存活情况。可以杀死所有细胞的最低浓度即为所需
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】能够使限制酶切割目的基因，以便于和质粒连接；5'端；使DNA分子高温变性解旋；使引物与目的基因通过碱基互补配对结合；XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ；将未导入外源基因的sT2细胞在一系列浓度梯度嘌呤霉素的培养液中培养，一段时间后，检测不同浓度溶液中sT2细胞的存活情况。可以杀死所有细胞的最低浓度即为所需
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：10引用：1难度：0.7
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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