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酿酒酵母不能利用木糖,这制约了人们利用植物原料来生产乙醇。木酮糖激酶是木糖转化,利用的关键酶,为提高酵母细胞中木酮糖激酶的含量,科研人员将两种启动子与木酮

糖激酶基因结合并导入酿酒酵母细胞,构建能同时利用葡萄糖和木糖的重组酿酒酵母。如图表示相关研究过程,图中几种限制性内切核酸酶的识别序列及切割位点。请回答:
(1)重组质粒中终止子的作用是 使转录终止(或使RNA聚合酶与模板分离)使转录终止(或使RNA聚合酶与模板分离)。表中切割DNA后形成相同黏性末端的限制酶是 XhoⅠ与SalⅠXhoⅠ与SalⅠ,黏性末端为 -AGCT(或TCGA-)-AGCT(或TCGA-)。
(2)过程③使用的限制性内切核酸酶是 EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BamHⅠ。过程⑤需先用LiAc处理酿酒酵母细胞,其目的是 增大酵母细胞的通透性增大酵母细胞的通透性,使细胞处于能吸收环境中DNA的状态。
(3)结合图示分析,进行工程菌筛选时,在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的酿酒酵母,这是因为 普通质粒上有抗四环素基因,导入普通质粒的酵母也能在含四环素的培养基上生长繁殖普通质粒上有抗四环素基因,导入普通质粒的酵母也能在含四环素的培养基上生长繁殖。
(4)研究人员对筛选得到的两种重组酵母(甲中导入启动子A,乙中导入启动子B)细胞中木酮糖激酶活力及发酵乙醇得率进行比较(发酵条件:1L,含15g•L-1的葡萄糖和50g•L-1的木糖培养基,120h),结果如下表。
分类 | 木酮糖激酶酶活力/U•mg-1 | 葡萄糖消耗量/g•L-1 | 木糖消耗量/g•L-1 | 乙醇得率/g•g-1 |
重组酿酒酵母甲 | 0.24 | 14.59 | 48.61 | 0.34 |
重组酿酒酵母乙 | 0.56 | 14.98 | 49.39 | 0.39 |
弱
弱
,但本实验中乙醇得率相差不大,其可能的原因是 实验中发酵时间过长(或培养基中的葡萄糖和木糖含量过少)
实验中发酵时间过长(或培养基中的葡萄糖和木糖含量过少)
。【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】使转录终止(或使RNA聚合酶与模板分离);XhoⅠ与SalⅠ;-AGCT(或TCGA-);EcoRⅠ、BamHⅠ;增大酵母细胞的通透性;普通质粒上有抗四环素基因,导入普通质粒的酵母也能在含四环素的培养基上生长繁殖;弱;实验中发酵时间过长(或培养基中的葡萄糖和木糖含量过少)
【解答】
【点评】
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发布:2024/5/23 20:38:36组卷:0引用:1难度:0.6
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