人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。
（1）为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需要用限制酶 MunⅠ和XhoⅠMunⅠ和XhoⅠ对图所示载体的部分结构进行酶切处理，这样选择的理由是 选择这两个酶不会破坏荧光蛋白基因（或Nhe和EcoRI会切割荧光蛋白基因），且二者黏性末端序列不同，能帮助γ基因上游序列定向连接；选择这两个酶不会破坏荧光蛋白基因（或Nhe和EcoRI会切割荧光蛋白基因），且二者黏性末端序列不同，能帮助γ基因上游序列定向连接；；在对γ基因上游片段进行扩增时，需在引物 5’端5’端末端添加限制酶识别序列，据图可知，在F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是 SalⅠSalⅠ。在R末端添加的序列所对应的限制酶是 EcoRⅠEcoRⅠ，这样选择的理由是 SalⅠ和XhoⅠ互为同尾酶，EcoRⅠ和MunⅠ互为同尾酶，扩增产物经相应酶切后所得有效片段唯一且可定向连接于荧光蛋白基因上游并能对荧光蛋白基因进行正确转录（或由右向左进行转录）SalⅠ和XhoⅠ互为同尾酶，EcoRⅠ和MunⅠ互为同尾酶，扩增产物经相应酶切后所得有效片段唯一且可定向连接于荧光蛋白基因上游并能对荧光蛋白基因进行正确转录（或由右向左进行转录）。综上所述本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要 66种酶。
（2）将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，成功转化后，含F1～F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是 F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。
（3）向培养液中添加适量的雌激素，含F1～F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光。而含F5～F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测。BCL11A蛋白结合位点位于 引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上，理由是 根据有无荧光情况判断，F1～F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游（右侧）；F5～F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游（左侧），所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上根据有无荧光情况判断，F1～F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游（右侧）；F5～F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游（左侧），所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上。
【答案】MunⅠ和XhoⅠ；选择这两个酶不会破坏荧光蛋白基因（或Nhe和EcoRI会切割荧光蛋白基因），且二者黏性末端序列不同，能帮助γ基因上游序列定向连接；；5’端；SalⅠ；EcoRⅠ；SalⅠ和XhoⅠ互为同尾酶，EcoRⅠ和MunⅠ互为同尾酶，扩增产物经相应酶切后所得有效片段唯一且可定向连接于荧光蛋白基因上游并能对荧光蛋白基因进行正确转录（或由右向左进行转录）；6；F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达；引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上；根据有无荧光情况判断，F1～F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游（右侧）；F5～F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游（左侧），所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：13引用：1难度：0.6
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