抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）在人体中主要由肝脏合成，是存在于血浆中的一种重要的抗凝血因子。研究者将人的抗凝血酶Ⅲ基因导入奶山羊细胞，获得乳汁中含有大量重组人的抗凝血酶Ⅲ的转基因克隆奶山羊。已知β-酪蛋白广泛存在于哺乳动物的乳汁中。回答下列问题：
（1）抗凝血酶Ⅲ基因的获得与表达载体的构建：从人的 肝细胞肝细胞中获得抗凝血酶Ⅲ基因的mRNA，逆转录成cDNA，并利用 PCRPCR技术进行扩增。为顺利将抗凝血酶Ⅲ基因连接到奶山羊β-酪蛋白基因表达载体上，在设计引物时，应在引物前加入 限制酶的识别序列限制酶的识别序列特地选用β-酪蛋白基因表达载体的原因是 β-酪蛋白基因启动子会在乳腺细胞中起作用β-酪蛋白基因启动子会在乳腺细胞中起作用。与抗凝血酶III基因一起连接到基因表达载体上的还有新霉素抗性基因，该基因的作用是 用于筛选含有目的基因的受体细胞用于筛选含有目的基因的受体细胞。
（2）山羊成纤维细胞的培养、转化和筛选：取幼龄雌性动物的组织，经 机械切割和胰蛋白酶处理机械切割和胰蛋白酶处理处理后获得成纤维细胞悬液，将带有ATⅢ转基因载体的脂质体（由磷脂和胆固醇组成的脂质双分子层所构成的封闭囊泡）与成纤维细胞共培养，获得含有目的基因的受体细胞，该转化方法的原理是细胞膜具有一定的流动性细胞膜具有一定的流动性。
（3）转基因奶山羊的克隆：将经 营养限制性培养营养限制性培养培养后的转基因细胞取核移入去核卵母细胞中，用 电刺激电刺激处理后进行胚胎体外培养。在移植到 同期发情同期发情的代孕母羊的子宫前，应将早期胚胎培养在 一系列含有不同成分一系列含有不同成分的培养液中。代孕母羊怀孕、分娩获得转基因克隆奶山羊。
（4）人的抗凝血酶Ⅲ的分子量大小及含量检测：收集转基因羊的羊奶和正常对照羊奶进行蛋白质凝胶电泳，使不同分子量的蛋白质在凝胶上分开，根据与 蛋白质分子质量标准物和空白对照蛋白质分子质量标准物和空白对照比较，确定奶中抗凝血酶Ⅲ的分子量大小。利用 荧光标记的抗人的抗凝血酶Ⅲ抗体荧光标记的抗人的抗凝血酶Ⅲ抗体与人的抗凝血酶Ⅲ进行特异性结合，根据荧光强度判断羊奶中抗凝血酶Ⅲ的含量。若最终获得的抗凝血酶Ⅲ不能很好地行使其功能，可利用 蛋白质蛋白质工程进行改造。
【考点】基因工程的操作过程综合；体外受精和胚胎移植．
【答案】肝细胞；PCR；限制酶的识别序列；β-酪蛋白基因启动子会在乳腺细胞中起作用；用于筛选含有目的基因的受体细胞；机械切割和胰蛋白酶处理；细胞膜具有一定的流动性；营养限制性培养；电刺激；同期发情；一系列含有不同成分；蛋白质分子质量标准物和空白对照；荧光标记的抗人的抗凝血酶Ⅲ抗体；蛋白质
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/4/20 14:35:0组卷：19引用：2难度：0.7
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
