血管内皮生长因子（VEGF）是在肿瘤细胞中通过表达，分泌到血液中的蛋白质类生长因子，促进肿瘤血管的生成，进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了pVAX1-VEGF的DNA疫苗，为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题：
（1）首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA，通过 反转录法反转录法获得VEGF基因。
（2）对获取的VEGF基因进行PCR扩增前，需要根据VEGF基因序列设计两种引物，而不是一种引物，其原因是 基因的两条反向平行的链都做模板，其碱基序列不同基因的两条反向平行的链都做模板，其碱基序列不同。为便于VEGF基因与质粒pVAX连接，需要在引物的 5'5'端加上相关限制酶的酶切位点。扩增时，每个循环一般要经历“变性、复性、延伸”三个过程，其中 复性复性温度过高，则引物无法与 DNA模板DNA模板结合，
可能导致PCR反应得不到任何扩增产物。
（3）构建的pVAX1-VEGF上应含有特定的 启动子启动子（填“复制原点”“启动子”或“标记基因”），它能被受体细胞的 RNA聚合酶RNA聚合酶所识别，以便于驱动基因的转录。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】反转录法；基因的两条反向平行的链都做模板，其碱基序列不同；5'；复性；DNA模板；启动子；RNA聚合酶
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：6引用：1难度：0.7
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：4引用：3难度：0.7
