羊绒素有“软黄金”之称，内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊是我国的两大产绒品种．我国生物学家运用现代生物技术培育出了转基因绒山羊．其过程如图1所示：

（1）在辽宁绒山羊细胞中获取的IGF 一I基因在导入胚胎干细胞之前须

构建基因表达载体

构建基因表达载体

，这是基因工程操作的核心步骤，若该过程使用的质粒是双链闭合环状的DNA分子，用两种识别序列不同的限制酶M和N切割（识别序列和切割位点如图2），通过凝电泳分离分析得下表．

使用限制酶	酶切结果（单位：Kb）
酶M	1.0、5.0、10.0
酶M+酶N	1.0、2.0、3.0、4.0、5.0

（2）①在该质粒中，N酶的切割位点有

2

2

个．
 ②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，连接后的序列是否能用M酶、N酶进行切割？

不能

不能

（填“能”或“不能”）．
（3）胚胎干细胞（ES）可由囊胚的

内细胞团

内细胞团

有分离培养获得．转基因胚胎干细胞培养过程中应定期

更换培养液

更换培养液

，防止细胞代谢产物对细胞自身造成危害．
（4）干细胞经扩大培养诱导分化为早期胚胎，随后即可植入经

同期发情

同期发情

处理的代孕母羊体内．