鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。如图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
| 限制酶 | 识别序列和切割位点 |
| EcoRⅠ |  |
| BamHⅠ |
|
鸡干扰素基因两端的部分核苷酸序列
鸡干扰素基因两端的部分核苷酸序列
。科研人员还在两种引物的一端分别加上了 GAATTC
GAATTC
和 GGATCC
GGATCC
序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是 AC
AC
。A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有
复制原点
复制原点
，步骤③中需先用 Ca2+
Ca2+
处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过
逆转录
逆转录
获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是 鸡干扰素基因未能导入烟草愈伤组织细胞或导入烟草愈伤组织细胞的鸡干扰素基因未能转录
鸡干扰素基因未能导入烟草愈伤组织细胞或导入烟草愈伤组织细胞的鸡干扰素基因未能转录
。（4）用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，而转基因植株在第
22
22
天才进入平台期，但此时的病情指数为79．说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有 实验得到的干扰素表达量较低，未能很好启动机体产生抗性或病毒接种量过大，相对来说干扰素诱导调控作用滞后或植物体内缺乏干扰素受体，导致外源基因表达的干扰素诱导或调控作用减弱
实验得到的干扰素表达量较低，未能很好启动机体产生抗性或病毒接种量过大，相对来说干扰素诱导调控作用滞后或植物体内缺乏干扰素受体，导致外源基因表达的干扰素诱导或调控作用减弱
。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】鸡干扰素基因两端的部分核苷酸序列；GAATTC；GGATCC；AC；复制原点；Ca2+；逆转录；鸡干扰素基因未能导入烟草愈伤组织细胞或导入烟草愈伤组织细胞的鸡干扰素基因未能转录；22；实验得到的干扰素表达量较低，未能很好启动机体产生抗性或病毒接种量过大，相对来说干扰素诱导调控作用滞后或植物体内缺乏干扰素受体，导致外源基因表达的干扰素诱导或调控作用减弱
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：241引用：3难度：0.3
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
