PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），大小为1.5kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。如图为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见表。回答下列问题：
（1）为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经 逆转录逆转录过程得到DNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合，驱动基因的 转录转录；
（3）为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，需在扩增的phb2基因两端分别引入下列哪两种不同限制酶的识别序列 AA（填选项）
A．EcoRⅠ和PvitⅡ
B．PvitⅡ和KpnⅠ
C．EcoRⅠ和KpnⅠ
（4）经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用 T4DNA连接酶T4DNA连接酶（填“E.coli DNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
相关限制酶的识别序列及切割位点（注：箭头表示切割位点）
| 名称 | HindⅢ | PvitⅡ | KpnⅠ | EcoRⅠ | PstⅠ | BamHⅠ |
| 识别序列及切割位点 | A↓AGCTT TTCGA↑A |
GAG↓CTG GTC↑GAG |
G↓GTACC CCATG↑G |
G↓AATTC CTTAA↑G |
CTGC↓AG GA↑CGTC |
G↓GATCC CCTAG↑G |
易接受外源DNA片段
易接受外源DNA片段
的生理状态，以提高转化效率。（6）将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，
2
2
号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒.【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；RNA聚合酶；转录；A；T4DNA连接酶；易接受外源DNA片段；2
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：8引用：1难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
