为培育香型抗稻瘟病水稻，研究者利用CRISPR-Cas9基因编辑技术（机理如图1），将含有Cas9和gRNA基因的表达载体（如图2）导入水稻，定向敲除香味抑制基因Badh2、感稻瘟病基因Pi21。
（1）CRISPR-Cas9系统能精准敲除靶基因，其作用机理是gRNA与靶基因进行 碱基互补配对碱基互补配对；Cas9蛋白可催化 磷酸二酯键磷酸二酯键（填化学键名称）水解，剪切特定DNA片段，被切割的DNA修复时会引起 基因突变基因突变（变异类型），导致基因失活。
（2）研究者用农杆菌转化法将CRISPR-Cas9表达载体导入水稻愈伤组织。为筛选成功导入表达载体的水稻愈伤组织，培养基中需加入 潮霉素潮霉素。
（3）为研究水稻的靶点突变情况，提取 潮霉素抗性植株的DNA潮霉素抗性植株的DNA，并设计 Badh2和Pi21的特异性引物Badh2和Pi21的特异性引物，进行PCR扩增并测序分析，获得Pi21-Badh2双基因突变杂合株系。
（4）将Pi21-Badh2双基因突变杂合株系 自交自交，以获得不含转基因成分（无T-DNA）的纯合突变植株。
①子代中，Pi21-Badh2双基因突变纯合子的概率为1/16，则两基因的位置关系为：非同源染色体上的非等位基因非同源染色体上的非等位基因。
②对纯合突变植株利用Cas9的引物进行扩增，结果如图3，应选取植株 2、5、6、72、5、6、7对突变基因做进一步的功能鉴定。从生物安全的角度，阐明选择的理由：若不去除该基因编辑系统，其持续发挥作用，可能会对基因再编辑、破坏遗传稳定性若不去除该基因编辑系统，其持续发挥作用，可能会对基因再编辑、破坏遗传稳定性。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】碱基互补配对；磷酸二酯键；基因突变；潮霉素；潮霉素抗性植株的DNA；Badh2和Pi21的特异性引物；自交；非同源染色体上的非等位基因；2、5、6、7；若不去除该基因编辑系统，其持续发挥作用，可能会对基因再编辑、破坏遗传稳定性
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：19引用：2难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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