在转基因植株培育过程中，通常在利用除草剂抗性基因作为标记基因对转化细胞进行筛选后，再将该类标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施之一。啤酒酵母中的FLP重组酶可以定点删除位于两个frt（短特异性靶DNA序列）之间的基因。研究人员将含frt位点的重组T质粒A和含FLP重组酶基因的重组Ti质粒B先后转入烟草植株，再通过热诱导处理，最终成功培育出了无绿黄隆（一种除草剂）基因（als）的转基因耐盐烟草植株。
回答下列问题：
（1）Ti质粒中的T-DNA的作用是

（T-DNA）可整合到受体细胞的染色体DNA上

（T-DNA）可整合到受体细胞的染色体DNA上

。
（2）在构建重组T质粒A时，先选择图1中的引物

2、3

2、3

对als基因进行PCR扩增，再用

NcoⅠ、PstⅠ

NcoⅠ、PstⅠ

酶同时切割als基因和Ti质粒A（图2），并利用

DNA连接

DNA连接

酶连接形成重组Ti质粒A。

（3）提取啤酒酵母的RNA，通过

逆转录

逆转录

获得

cDNA

cDNA

，再利用PCR扩增出FLP重组酶基因。为便于构建出重组Ti质粒B（图3），可在FLP重组酶基因PCR引物的

5’端

5’端

（5'端/3'端）加上BamHI和KpnⅠ酶的识别序列。
（4）通常采用

农杆菌转化

农杆菌转化

法先后将重组Ti质粒A和B转入烟草细胞中，并在含

潮霉素、绿黄隆

潮霉素、绿黄隆

的培养基中培养，筛选出含重组Ti质粒A和B的转化细胞。
（5）相比于普通启动子，本实验选择hsp启动子的优势是

可在筛选出转基因植株后，再通过热诱导将als基因切除

可在筛选出转基因植株后，再通过热诱导将als基因切除

。
（6）als基因长度约1.7kb,经热诱导被FLP重组酶成功切除后，其长度变为0.4kb。提取若干经热诱导处理的转基因烟草植株的DNA，进行PCR扩增，其电泳检测结果如图4所示。图中

1、3

1、3

（填数字）所对应植株为成功切除als基因的转基因烟草植株。