甘蓝型油菜中，抑制PEP基因的表达可提高油菜籽的含油量。通过基因工程将PEP基因反向连接在启动子后，构建转反义PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技术路径。请回答下列问题：
（1）为将PEP基因反向连接在启动子后，构建反义PEP基因，需要将限制酶切位点设计在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中应分别引入 ScaⅠ、HamHⅠScaⅠ、HamHⅠ酶切位点。
（2）用激光照射油菜愈伤组织时，可在细胞膜上打出一个穿孔，转反义PEP基因表达载体由此小孔进入油菜细胞，几秒种后小孔封闭，该过程体现了细胞膜具有 流动性流动性。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的 T-DNAT-DNA区段可转移到油菜细胞的基因组中。
（3）筛选时，需在油菜愈伤组织培养基中加入 新霉素新霉素进行初步选择。在激光照射下，存活的细胞一般会发出 绿色荧光绿色荧光。为检测反义PEP基因是否整合到染色体上，研究者通常用检测细胞中是否存在ntp基因，而不检测PEP基因。不直接检测PEP基因的原因是 油菜细胞的基因组中本身有PEP基因油菜细胞的基因组中本身有PEP基因。
（4）已知PEP基因的转录模板链为A链，则反义PEP基因的转录模板为 B链B链。转反义PEP基因油菜中PEP基因的表达受阻，原因是 以B链为模板转录出的RNA与以A链为模板转录出的RNA配对形成双链，抑制了PEP基因的表达以B链为模板转录出的RNA与以A链为模板转录出的RNA配对形成双链，抑制了PEP基因的表达。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】ScaⅠ、HamHⅠ；流动性；T-DNA；新霉素；绿色荧光；油菜细胞的基因组中本身有PEP基因；B链；以B链为模板转录出的RNA与以A链为模板转录出的RNA配对形成双链，抑制了PEP基因的表达
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：17引用：3难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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