基因定点突变是指按照特定的要求，使基因的特定序列发生插入、删除、置换、重排等变异。如图甲是一种PCR介导的基因定点突变示意图。图乙是研究人员利用基因M1构建基因表达载体的过程。
（1）图甲所示的基因定点突变技术需要多次PCR，并对PCR的中间产物A、B进行纯化，据图分析，得到中间产物A、B需要的引物对分别是 引物1和引物3、引物2和引物4引物1和引物3、引物2和引物4，至少要进行 22轮循环。研究人员利用图中相关酶对基因M和产物A、B进行充分酶切后得到不同的片段，长度（kb）如下表，则图中基因敲除片段的长度为 0.23kb0.23kb，基因M1的长度为 6.09kb6.09kb。
| 基因M | A | B | |
| 长度 | 3.24、2.8、0.15、0.13 | 2.8、0.09 | 3.24、0.05 |
真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活
真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活
。鉴定PCR产物通常用 琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
方法。（3）研究人员将基因M1与Ti质粒重构前需要在基因M1的C、D两端分别加上的黏性末端序列为
-TCGA、ACGT-
-TCGA、ACGT-
。构建重组质粒过程所需要的酶有 HindⅢ、PstI、DNA连接酶
HindⅢ、PstI、DNA连接酶
。（4）重组质粒能够完成转化作用的原理是
Ti质粒上的T-DNA能够转移并整合到受体细胞的染色体上
Ti质粒上的T-DNA能够转移并整合到受体细胞的染色体上
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】引物1和引物3、引物2和引物4；2；0.23kb；6.09kb；真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活；琼脂糖凝胶电泳；-TCGA、ACGT-；HindⅢ、PstI、DNA连接酶；Ti质粒上的T-DNA能够转移并整合到受体细胞的染色体上
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：53引用：3难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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