重叠延伸PCR技术是常规PCR技术的衍生，它依据需要连接的基因中核苷酸序列（或基因片段）设计出多对具有互补末端的引物，先分段对模板进行扩增，再将PCR产物混合，其中的重叠链将相互搭桥、互为模板而延伸，最终实现不同来源的扩增片段重叠拼接起来的目的，如图1所示。请分析并回答下列问题：
（1）图1中的过程②在 22个反应体系中进行，原因是 引物互补影响PCR结果引物互补影响PCR结果。经过程②后，体系中存在不同长度的DNA片段，获取所需DNA的方法是 琼脂糖凝胶电泳分离琼脂糖凝胶电泳分离。①中引物2和引物3的游离部分分别与 外显子B、外显子A外显子B、外显子A的部分序列同源。
（2）图1中的过程⑥不需要不需要（填“需要”或“不需要”）另加引物，原因是 两条DNA的交错部分即可作为其延伸的引物两条DNA的交错部分即可作为其延伸的引物。进行②⑥⑧⑩过程时，需要在一定的缓冲溶液中进行，⑩过程除图示条件还需要加入 四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶。
（3）重叠延伸PCR技术可用于基因的定点突变。基因定点突变是根据目的基因（如图2蛋白A基因）的序列，设计4条单链核苷酸片段为引物（图2中的引物A→D），原理是取引物A、B进行PCR1反应，以及引物C、D进行PCR2反应，然后将需要的两个片段混合、延伸并大量扩增。图2引物B和引物C中的“∧”代表 突变碱基突变碱基，引物B和引物C碱基序列间存在的关系是 互补互补。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；目的基因的筛选与获取．
【答案】2；引物互补影响PCR结果；琼脂糖凝胶电泳分离；外显子B、外显子A；不需要；两条DNA的交错部分即可作为其延伸的引物；四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶；突变碱基；互补
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：25引用：2难度：0.7
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：4引用：3难度：0.7
