肠道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白为VP1～VP4，分别由V1～V4基因控制。为研究VP1～VP4的抗原性，从中筛选出EV71的疫苗抗原，研究人员利用基因工程技术生产了上述4种蛋白质。如图是制备V1基因表达载体的过程示意图，请回答下列问题：
gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解为蓝色物质
Kan：卡那霉素抗性基因
（1）以RNA为模板，通过4组RT-PCR可分别获取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有 逆转录酶和Taq酶逆转录酶和Taq酶，该过程中子链延伸时所需的能量较为特殊，一般来自 dNTPdNTP。
（2）为方便目的基因与质粒的连接，通常将限制酶的切点设计在引物上。引物一般为单链DNA，新合成子链的延伸方向为5′→3′。PCR获取V1基因时，10引物中限制酶切点的碱基序列应设计为上游引物3′…GGATCCGGATCC…5′，下游引物3′…CTCGAGCTCGAG…5′。
（3）用相关限制酶处理质粒和V1基因后，再与 DNA连接DNA连接酶混合，加入大肠杆菌温育。一段时间后，将菌液涂布在含有 β—葡萄糖苷酸β—葡萄糖苷酸和 卡那霉素卡那霉素的平板上，经培养，在平板上长出白色和蓝色两种菌落，其中 白色白色菌落含有V1基因表达载体，判断依据是 构建目的基因表达载体时切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培养基上，含重组V1基因质粒的大肠杆菌不显蓝色构建目的基因表达载体时切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培养基上，含重组V1基因质粒的大肠杆菌不显蓝色。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录酶和Taq酶；dNTP；GGATCC；CTCGAG；DNA连接；β—葡萄糖苷酸；卡那霉素；白色；构建目的基因表达载体时切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培养基上，含重组V1基因质粒的大肠杆菌不显蓝色
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：10引用：1难度：0.6
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
