异丁醇具有燃值高、能量密度高等优点，其开发和利用对优化我国能源结构和保护环境有非常重要的战略意义。基于酿酒酵母的发酵途径（图甲）和图乙的质粒，研究者构建了一种表达载体pUC18，用于过表达ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以实现异丁醇的大规模生产。已知氨苄青霉素能抑制细菌细胞壁的形成。据此回答下列问题：
（1）图乙质粒上有多个限制酶切位点，作用是 便于插入多种外源基因便于插入多种外源基因。研究人员先用pUC18转化经 Ca2+处理Ca2+处理（处理方法）的大肠杆菌，以便筛选、鉴定扩增重组质粒。重组质粒上有 原核生物的复制原点原核生物的复制原点，所以能在大肠杆菌中扩增。
（2）将环状载体pUC18导入酿酒酵母时，一般会将其进行酶切得到线性化载体，随后再将其导入受体细胞。根据所学的知识推测酶切得到线性化载体的目的是 线性化载体能整合到酿酒酵母染色体DNA，从而能更稳定存在并发挥功能线性化载体能整合到酿酒酵母染色体DNA，从而能更稳定存在并发挥功能。
（3）提取成功构建的表达载体并导入不能合成组氨酸的酿酒酵母菌株，将菌株接种在培养基中以获得单菌落，该过程称为微生物的 选择选择培养。培养基中需要添加的物质有 cc。
（用下列字母填写：a.组氨酸、b.氨苄青霉素、c琼脂）。
（4）异丁醇的大量积累会伤害细胞，研究人员给该工程菌导入一个经改造的光敏蛋白基因，使工程菌对特定的蓝光敏感。进行不同的光照处理，使其在异丁酵产生阶段和生长繁殖阶段进行切换，结果如下图丙所示。
注：5/10/20h pulse分别代表在黑暗条件下每隔5、10、20h发出15s和65s的蓝光脉冲30min
①对照组的酵母菌需要导入 不含光敏蛋白基因的空载体不含光敏蛋白基因的空载体。
②以葡萄糖为碳源，利用该转基因酿酒酵母进行发酵时，若想进一步提高其异丁醇产量，
综合图甲和图乙信息，分别写出进一步优化菌株和工艺的措施（各一点） 敲除该工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗条件下每隔10h发出15s和65s的蓝光脉冲30min敲除该工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗条件下每隔10h发出15s和65s的蓝光脉冲30min。
【答案】便于插入多种外源基因；Ca2+处理；原核生物的复制原点；线性化载体能整合到酿酒酵母染色体DNA，从而能更稳定存在并发挥功能；选择；c；不含光敏蛋白基因的空载体；敲除该工程菌的ADHs和ALDs基因，在黑暗条件下每隔10h发出15s和65s的蓝光脉冲30min
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：10引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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