某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。N蛋白胞外段单克隆抗体制备流程如图1：
（1）用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠腺组织用 机械机械方法或 胰蛋白胰蛋白酶处理，制成细胞悬液，置于含有 95%空气和5%的CO295%空气和5%的CO2气体的CO2培养箱中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。
（2）用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行 克隆化克隆化培养。用 抗原一抗体杂交抗原一抗体杂交技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集 细胞培养液细胞培养液，提取单克隆抗体。
（3）利用上述流程制备的N蛋白胞外段抗体能准确识别 抗原抗原的细微差异，与之发生特异性结合，并可 大量制备大量制备，因此被广泛用作诊断试剂。
（4）利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。抗体结构示意图如图2，引起HAMA反应的主要是“C区”，通过制备人鼠嵌合抗体可以解决HAMA反应。现利用重组DNA技术可以制备人鼠嵌合抗体，请写出简要制备思路：将异源单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的基因中，并构建基因表达载体，利用显微注射技术将表达载体导入哺乳动物细胞中，表达出嵌合抗体将异源单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的基因中，并构建基因表达载体，利用显微注射技术将表达载体导入哺乳动物细胞中，表达出嵌合抗体。
（5）为了进一步减少免疫排斥反应，科学家利用噬菌体展示库技术生产出全人源化单抗（单抗成分全部由人的基因编码）。具体操作如下，用PCR技术从生物体内扩增出整套编码人抗体的基因序列，克隆到噬菌体载体上，并以融合蛋白的形式表达到噬菌体表面，从而可以方便地对抗体进行筛选、扩增。但是利用这种方法制备的抗体结构准确程度下降，原因是 抗体是在原核细胞内表达，原核生物不能对真核生物的复杂蛋白进行准确加工抗体是在原核细胞内表达，原核生物不能对真核生物的复杂蛋白进行准确加工。
【考点】单克隆抗体及其应用．
【答案】机械；胰蛋白；95%空气和5%的CO2；克隆化；抗原一抗体杂交；细胞培养液；抗原；大量制备；将异源单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的基因中，并构建基因表达载体，利用显微注射技术将表达载体导入哺乳动物细胞中，表达出嵌合抗体；抗体是在原核细胞内表达，原核生物不能对真核生物的复杂蛋白进行准确加工
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：26引用：4难度：0.7
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（1）与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合的方法是，过程②选用的骨髓瘤细胞（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。
（2）对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行和，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是（答出一点）。
（3）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是。图2方框内需要经过次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是。发布：2024/12/31 1:30:1组卷：21引用：4难度：0.5 -
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