M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。分析回答：

（1）过程①当在无菌无毒的环境中培养细胞至出现

接触抑制

接触抑制

现象时，需要对其进行分瓶处理。为保证环境无毒，应采取的措施是

对培养液和所有的培养用具进行无菌处理，通常在培养液中添加一定量的抗生素，定期更换培养液，以便清除代谢产物

对培养液和所有的培养用具进行无菌处理，通常在培养液中添加一定量的抗生素，定期更换培养液，以便清除代谢产物

。
（2）过程②为显微操作去核过程，去除的“核”其实是

细胞核和第一极体

细胞核和第一极体

结构；与原生质体融合相比，过程③特有的诱导融合方法是

用灭活的病毒诱导

用灭活的病毒诱导

。
（3）为获得更多的克隆动物A.可在过程⑤胚胎移植前对胚胎进行分割，分割囊胚时，要注意

均等分割内细胞团

均等分割内细胞团

。
（4）鉴定转基因动物：以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路：

用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出杂交瘤细胞，利用抗原—抗体杂交技术，检测筛选出的杂交瘤细胞能否产生M蛋白的单克隆抗体。如果不能产生，说明M基因在克隆动物A中已失活，如果能产生，说明M基因在克隆动物A中没有失活

用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出杂交瘤细胞，利用抗原—抗体杂交技术，检测筛选出的杂交瘤细胞能否产生M蛋白的单克隆抗体。如果不能产生，说明M基因在克隆动物A中已失活，如果能产生，说明M基因在克隆动物A中没有失活

。