科研人员利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图1所示，①～④为操作步骤，BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ酶切位点唯一，识别序列和切割位点见表。
| 限制酶 | 识别序列和切割位点 |
| BamHⅠ | -G↓GATCC- |
| Bg1Ⅱ | -A↓GATCT- |
| EcoRⅠ | -G↓AATTC- |
基因表达载体的构建
基因表达载体的构建
，其目的是 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用
使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用
。（2）若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，质粒用BamHⅠ剪切，剪切后的目的基因和质粒能连接在一起，原因是
BamHI和BglⅡ切割DNA后产生相同的黏性末端
BamHI和BglⅡ切割DNA后产生相同的黏性末端
。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用 BamHI和EcoRI
BamHI和EcoRI
酶对两种重组质粒进行剪切，通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如图2所示，图中 样品2
样品2
（样品1/样品2）为所需基因表达载体。（3）步骤②用
Ca2+
Ca2+
处理农杆菌后获得容易吸收周围环境中DNA分子状态的细胞，以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共同培养后，在步骤④的培养基中添加 潮霉素
潮霉素
以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。若要检测甘蓝是否具有抗除草剂的性状，需要在个体水平进行鉴定，方法是 喷洒适宜浓度的除草剂
喷洒适宜浓度的除草剂
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因表达载体的构建；使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用；BamHI和BglⅡ切割DNA后产生相同的黏性末端；BamHI和EcoRI；样品2；Ca2+；潮霉素；喷洒适宜浓度的除草剂
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/2 8:0:9组卷：3引用：1难度：0.7
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