Sanger法DNA测序的核心原理：由于双脱氧核苷酸（ddNTP）五碳糖的2'和3'碳原子都不含羟基，在DNA合成过程中不能形成“相应化学键”，因此可中断DNA分子合成反应。在四个含有4种脱氧核苷酸（dNTP）的PCR反应体系中分别加入一定比例带有放射性同位素标记的ddNTP（分别为ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP），在PCR过程中复制随机终止，产生四组不同长度的一系列终止处带有标记的DNA片段，如图1．然后在变性凝胶上进行电泳和放射自显影后，可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列，具体过程见图2．（注：ddA是ddATP的缩写形式）
（1）题干中“相应化学键”是磷酸二酯键磷酸二酯键，图1过程Ⅰ横线①处加入的物质的特点是耐高温耐高温，该过程需要添加引物的原因是DNA聚合酶只能将游离的脱氧核苷酸添加到已有核酸片段上DNA聚合酶只能将游离的脱氧核苷酸添加到已有核酸片段上。
（2）题干中“在变性凝胶上进行电泳……”中“变性”是指破坏DNA分子中氢键，获得单链破坏DNA分子中氢键，获得单链，其目的是避免模板链对结果的影响（或使模板链与子链分离，使电泳结果直接反映子链的长度，便于读序）避免模板链对结果的影响（或使模板链与子链分离，使电泳结果直接反映子链的长度，便于读序）。
（3）某同学要通过PCR技术获得被32P标记且以碱基“C”为末端、不同长度的子链DNA片段，在反应管中已有模板、引物、酶和相应缓冲液等，还需加入的原料有dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTPdATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP。
（4）若模板链是“3'…TCAGCTCGAATC…5'”，变性后电泳结果如图2所示，则模板DNA电泳后所处的位置最可能为b处b处（选填“a处”或“b处”），原因是模板DNA长度最长（分子量最大）模板DNA长度最长（分子量最大）。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；目的基因的筛选与获取．
【答案】磷酸二酯键；耐高温；DNA聚合酶只能将游离的脱氧核苷酸添加到已有核酸片段上；破坏DNA分子中氢键，获得单链；避免模板链对结果的影响（或使模板链与子链分离，使电泳结果直接反映子链的长度，便于读序）；dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP；b处；模板DNA长度最长（分子量最大）
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：24引用：1难度：0.7
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
