稻米香味是水稻品质改良的一个重要内容。在非香型水稻品种中，Badh2基因表达产物--Badh2蛋白，会抑制香味物质2AP的合成，使得稻米丧失了香味。研究发现，香味物质2AP含量越高，稻米香味越强。为改良水稻的品质，科研人员利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将非香型粳稻中的Badh2基因进行定点编辑，从而获得Badh2发生突变的基因编辑6个株系。请回答下列问题：
（1）构建编辑水稻Badh2基因的CRISPR/Cas9系统表达载体时，首先要依据Badh2基因Badh2基因的部分序列设计编码特定向导RNA的DNA片段，再将该DNA片段与含有Cas9基因的Ti质粒连接，该过程所需的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶限制性核酸内切酶和DNA连接酶。
（2）将构建成功的表达载体通过农杆菌转化法导入水稻受体细胞，借助Ti质粒上的T-DNA，将目的基因转移并整合到受体细胞染色体DNA上整合到受体细胞染色体DNA上，从而使其得以维持稳定和表达。
（3）为了检测Badh2基因的突变体中Badh2基因的表达情况，研究人员分别提取了Badh2突变体和野生型植株的总RNA，经逆转录过程获得总cDNA，通过PCR技术可在总cDNA中专一性地扩增出Badh2基因的cDNA，原因是引物使根据Badh2基因的一段已知序列设计合成的引物使根据Badh2基因的一段已知序列设计合成的。
（4）各株系Badh2基因表达水平检测结果如图所示，据图推测香味最强的株系为株系E2-13株系E2-13，原因是株系E2-13的Badh2基因的基因表达水平最低，控制合成的Badh2蛋白最少，使得2AP合成量增加最多，稻米香味最强株系E2-13的Badh2基因的基因表达水平最低，控制合成的Badh2蛋白最少，使得2AP合成量增加最多，稻米香味最强。
（5）综合上述信息，请推测CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术还在基因治疗、研究基因功能、疾病治疗动物模型基因治疗、研究基因功能、疾病治疗动物模型（答出2点）等方面具有广阔的应用前景。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】Badh2基因；限制性核酸内切酶和DNA连接酶；整合到受体细胞染色体DNA上；引物使根据Badh2基因的一段已知序列设计合成的；株系E2-13；株系E2-13的Badh2基因的基因表达水平最低，控制合成的Badh2蛋白最少，使得2AP合成量增加最多，稻米香味最强；基因治疗、研究基因功能、疾病治疗动物模型
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：46引用：4难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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