人腺病毒3型能引起人产生急性呼吸系统疾病（ARD），具有较高的发病率和一定的致死率。研究人员利用人腺病毒5型商品化的质粒P5和基因工程等技术，构建新型的复制缺陷型腺病毒3型疫苗，用于预防ARD。

（1）腺病毒衣壳的H蛋白能够刺激机体产生特异性抗体。研究人员通过同源重组的方法利用质粒p5和重组质粒p3构建重组腺病毒3型表达载体pr3，并获得重组腺病毒3型株。过程如图1。
①实验中利用

PCR

PCR

技术扩增人腺病毒3型的H基因（H3），选用限制酶

EcoRV和XhoⅠ

EcoRV和XhoⅠ

和DNA连接酶以确保H3基因能正确连接在p3质粒的特定位置。
②p5质粒上由于缺失E1基因，表现复制缺陷。P3质粒与p5质粒的左臂与右臂存在相同的硪基序列，易发生

交换

交换

，有利于得到同源重组的pr3质粒，使之表现为与p5质粒相同的复制缺陷。pr3质粒经PacI酶处理后，将得到的DNA片段转染至A2细胞（能够表达E1蛋白）中，获得重组腺病毒3型株。转染至A2细胞中的DNA片段存在与

有H3蛋白、人源荧光蛋白、H5蛋白（病毒的衣壳蛋白）

有H3蛋白、人源荧光蛋白、H5蛋白（病毒的衣壳蛋白）

蛋白合成有关的基因。
（2）为评估重组腺病毒3型株作为抗原的有效性，研究人员使用抗H3单克隆抗体检测H3基因在A2细胞中的表达情况，结果如图2。
实验结果表明：

在重组腺病毒3型株的H3基因可在A2细胞表达，说明重组腺病毒3型株作为抗原的是有效的

在重组腺病毒3型株的H3基因可在A2细胞表达，说明重组腺病毒3型株作为抗原的是有效的

。
（3）为评估重组腺病毒3型株疫苗的安全性，分别用其感染A2细胞和A5细胞（与人体正常体细胞相同，不能表达E1蛋白），至少培养20代。在荧光显微镜下检测重组腺病毒3型株的繁殖情况，预期结果为

A2细胞可检测到大量的荧光，重组腺病毒3型进行了繁殖；在A5细胞几乎检测不到荧光，重组腺病毒3型没有繁殖

A2细胞可检测到大量的荧光，重组腺病毒3型进行了繁殖；在A5细胞几乎检测不到荧光，重组腺病毒3型没有繁殖

，说明疫苗安全。