PCR技术不仅可以扩增目的基因，还可用于定点诱变目的基因等。大引物PCR就是一种定点突变技术。大引物PCR需要用到引物进行两次PCR，其操作步骤为：
①根据目的基因序列设计引物，得到两个常规引物，分别为常规上游引物和常规下游引物；
②根据突变碱基所处序列位置设计突变上游引物，突变位点位于突变引物序列的中间位置
③由突变上游引物与常规下游引物进行第一次PCR反应得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一个常规上游引物进行第二次PCR扩增，得到突变目的基因序列。回答下列问题：
（1）PCR扩增的第一步是使双链模板DNA变性。DNA中G+C的含量与变性要求的温度有关，DNA中G+C的含量越多，要求的变性温度越高。其原因是 DNA中G和C之间有三个氢键，A和T之间只有两个氢键，G+C含量越多，其氢键越多，变性时所需温度越高DNA中G和C之间有三个氢键，A和T之间只有两个氢键，G+C含量越多，其氢键越多，变性时所需温度越高。该PCR扩增技术所需的基本条件是 33种引物、原料、模板、耐高温的DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶。
（2）在第一次PCR反应中，形成图示双链DNA至少要经过 22次复制。第一次PCR的产物DNA的 一一条链作为第二次PCR所用的引物。与X射线诱变相比，该突变技术的优点是 目的性强、突变概率高目的性强、突变概率高。
（3）如果要利用微生物进一步克隆PCR定点诱变产物，其步骤包括：目的基因与载体结合目的基因与载体结合、将重组DNA导入受体细胞将重组DNA导入受体细胞、微生物的筛选和培养、从菌群中获取更多目的基因。将获取目的基因和质粒进行连接后，需先用 Ca2+Ca2+处理农杆菌以便将基因表达载体导入马铃薯细胞，将马铃薯细胞培养成幼苗时经过的两个过程是 脱分化和再分化脱分化和再分化。检测目的基因是否在马铃薯细胞中转录出了mRNA，所采用的方法是 核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】DNA中G和C之间有三个氢键，A和T之间只有两个氢键，G+C含量越多，其氢键越多，变性时所需温度越高；3；耐高温的DNA聚合酶；2；一；目的性强、突变概率高；目的基因与载体结合；将重组DNA导入受体细胞；Ca2+；脱分化和再分化；核酸分子杂交技术
【解答】
【点评】
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发布：2024/12/30 23:0:2组卷：40引用：4难度：0.6
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
