木质纤维素是地球上最为丰富的可再生资源。中国科学家利用基因工程的方法构建了嗜热厌氧杆菌H，以花生壳、玉米芯等为原料发酵生产生物燃料乙醇，以期提高农业废弃物的整体利用价值。据此回答下列问题：
（1）研究者将取样器放入温泉底部取样，利用厌氧技术将样品稀释液接种到以纤维素为

为唯一碳源

为唯一碳源

的选择培养基中，在适宜条件下培养一段时间，加入刚果红后，出现

透明圈

透明圈

的即为初步筛选所得的降解纤维素的嗜热厌氧杆菌菌落。
（2）基于嗜热厌氧杆菌的特殊代谢能力（图a），研究人员构建了双功能醇醛脱氢酶基因（Adh）的过量表达载体，图b为构建表达载体时所需的关键条件。

①为保证双功能醇醛脱氢酶基因（Adh）能通过双酶切以正确方向插入质粒，需设计引物1和引物2，其中引物1包含图b中限制酶

KpnI

KpnI

的识别序列，且该序列位于引物1的

5’端

5’端

（填“5’端”或“3’端”）。
②将重组表达载体导入嗜热厌氧杆菌，然后置于含有

红霉素

红霉素

的选择培养基中进行筛选，经鉴定及扩大培养得到工程菌H。
（3）将构建的工程菌H进行摇瓶发酵，结果发现乙醇产量提高，副产物乙酸产量下降。结合其代谢途径，分析出现这种结果的原因

Adb基因过量表达的Adh酶增多，与P酶竞争结合乙酰辅酶A

Adb基因过量表达的Adh酶增多，与P酶竞争结合乙酰辅酶A

。
（4）嗜热厌氧杆菌最适生长温度为55～75℃，产物乙醇在温度超过50℃即可快速蒸馏出。相对于传统的发酵菌株，利用嗜热厌氧杆菌发酵产乙醇主要的优势有

①高温发酵可杀灭杂菌或抑制杂菌的生长，从而减少发酵污染；②高温能够促进乙醇的回收，有利于连续蒸馏；③嗜热厌氧菌在大规模培养时不需要供氧；④高温环境下微生物代谢活性及产物转化率较高。

①高温发酵可杀灭杂菌或抑制杂菌的生长，从而减少发酵污染；②高温能够促进乙醇的回收，有利于连续蒸馏；③嗜热厌氧菌在大规模培养时不需要供氧；④高温环境下微生物代谢活性及产物转化率较高。

（写出两点即可）。