新冠疫苗有多种，包括灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、重组亚单位疫苗和核酸疫苗等。如图为其中一种疫苗的研发思路，图中①～⑦表示过程，箭头表示NcoⅠ、SphⅠ、NheⅠ、BamHⅠ的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因SUC2控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。

限制酶	NcoⅠ	SphⅠ	NheⅠ	BamHⅠ
识别序列和切割位点	C↓CATGG	CCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

（1）图中①过程需要使用逆转录酶先得到cDNA，再使用

PCR

PCR

技术扩增得到S基因。完成以后，常采用

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳

鉴定扩增产物。
（2）为使③过程顺利进行，需先使用限制酶

NcoⅠ

NcoⅠ

和

NheⅠ

NheⅠ

切割质粒B，选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割的目的是

防止S基因自身环化（防止载体自身环化、防止S基因与载体反向连接）

防止S基因自身环化（防止载体自身环化、防止S基因与载体反向连接）

（答出一点即可）。
（3）图中表示筛选的过程是⑤，为达到利用标记基因筛选的目的，普通的P型酵母菌应该满足的条件是

不能合成蔗糖酶，无法利用培养基中的蔗糖生存

不能合成蔗糖酶，无法利用培养基中的蔗糖生存

。