研究表明来源于大肠杆菌的苏氨酸输出蛋白（由rhtA基因编码）能够识别5-氨基乙酰丙酸，并将其输出至细胞外。为探究苏氨酸输出蛋白对5-氨基丙酸合成的影响，研究人员从大肠杆菌的基因组DNA中扩增出rhtA基因，并构建出相应的重组质粒，获得转rhtA基因的工程菌，其基本操作流程如图1所示，已知引物A、B的序列分别是：5′-AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG-3′、5′-GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC-3′。
回答下列问题：
（1）由图可知，获取大量rhtA基因要经PCR技术扩增，若要扩增出N个rhtA基因，需要引物A、B各 N-1N-1个，对引物A的设计要求是 不能自身成环、不能与引物B互补配对、长度要适中不能自身成环、不能与引物B互补配对、长度要适中（答出2点即可）；通过过程①得到重组质粒，需选用的两种限制酶是 EcoRⅠ和HindⅠEcoRⅠ和HindⅠ，两者起作用部位的化学键是 磷酸二酯键磷酸二酯键。
（2）过程②⑤在操作时，一般需用钙离子处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种 感受态细胞感受态细胞的生理状态。过程③将大肠杆菌体内的质粒提取出来进行验证时，以EeoRⅠ切割pEC-XK99E质粒为对照，分别对重组质粒用EcoRⅠ单酶切、以（1）选用的双酶对重组质粒进行双酶切，然后用电泳技术进行验证，其实验结果如图2所示，若2是对照，则3、4分别是单酶切、双酶切的结果，做出此推测的依据是 用EcoRⅠ单酶切对照和重组质粒，均使质粒成为线形，2的DNA条带略比3小，是因为3多了一段rhtA基因序列，4被双酶切后形成两个DNA片段，此两段DNA的大小相加刚好与3基本相同用EcoRⅠ单酶切对照和重组质粒，均使质粒成为线形，2的DNA条带略比3小，是因为3多了一段rhtA基因序列，4被双酶切后形成两个DNA片段，此两段DNA的大小相加刚好与3基本相同。
（3）将正确的质粒导入A19后，后续的步骤是 目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定。本技术选用微生物大肠杆菌作为受体细胞，而不选用动物细胞，理由是 微生物繁殖速度快，可在短时间内获得大量基因表达的产物微生物繁殖速度快，可在短时间内获得大量基因表达的产物（答出一点即可）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】N-1；不能自身成环、不能与引物B互补配对、长度要适中；EcoRⅠ和HindⅠ；磷酸二酯键；感受态细胞；用EcoRⅠ单酶切对照和重组质粒，均使质粒成为线形，2的DNA条带略比3小，是因为3多了一段rhtA基因序列，4被双酶切后形成两个DNA片段，此两段DNA的大小相加刚好与3基本相同；目的基因的检测与鉴定；微生物繁殖速度快，可在短时间内获得大量基因表达的产物
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：17引用：5难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
