研究人员利用农杆菌介导法和花粉管通道法培育出转抗寒基因PgLCBF1的月季石榴，主要过程示意图如图。请回答下列问题。
（1）质粒pBI121的复制原点中A-T比例高，有利于 解旋解旋。过程①用限制酶XbaⅠ分别切割质粒和抗寒基因，原因是 形成相同的黏性末端，便于将目的基因插入到质粒特定部位形成相同的黏性末端，便于将目的基因插入到质粒特定部位。
（2）过程②筛选时，应将菌液用 稀释涂布平板稀释涂布平板法接种培养，使用的培养基除水、无机盐、碳源、氮源和生长因子外，还应加入的物质有 琼脂、新霉素琼脂、新霉素。实验中过程③扩大培养的主要目的是 转基因大肠杆菌快速增殖，获得更多的重组质粒（或获得更多的重组质粒）转基因大肠杆菌快速增殖，获得更多的重组质粒（或获得更多的重组质粒）。
（3）转基因农杆菌借助萌发的花粉管运输，将PgLCBF1导入 受精卵受精卵中，最终获得转基因种子，经播种、筛选出抗寒月季石榴新品种。与农杆菌直接转化月季石榴叶肉细胞相比，花粉管通道转化法具有的优点有 操作简单、直接，不需要经过植物组织培养，转化成功后可直接获得种子操作简单、直接，不需要经过植物组织培养，转化成功后可直接获得种子。
（4）为探究上述农杆菌菌液侵染的合适介质和时期，研究人员进行了如下实验，请完成下表。
| 实验步骤 | 简要操作过程 |
| 采集花粉 | 摘取花粉成熟的月季石榴花，自然阴干，收集花粉 |
| 配制不同介质 | 配制植物组织培养液（MS）、质量浓度为5%蔗糖溶液、MS+5%蔗糖混合溶液 |
| 配制农杆菌侵染液 | 取5mL转基因农杆菌菌液，分别与① 等量的上述不同介质（植物组织培养液（MS）、质量浓度为5%蔗糖溶液、MS+5%蔗糖混合溶液） 等量的上述不同介质（植物组织培养液（MS）、质量浓度为5%蔗糖溶液、MS+5%蔗糖混合溶液） 混匀 |
| ② 人工授粉 人工授粉 |
蘸取收集好的花粉，轻轻点涂在花柱的柱头上 |
| 侵染转化 | 分别在授粉时和授粉后24h,选择柱头未开裂的花，③ 用等量不同的农杆菌侵染液涂抹传粉后的月季石榴花柱头 用等量不同的农杆菌侵染液涂抹传粉后的月季石榴花柱头 并作标记，每个处理侵染10朵花。 |
| 结果统计分析 | 分组获得月季石榴种子，催芽播种、培植植株，统计坐果率、种子出芽率和转化阳性率。（坐果率=坐果数/侵染花数×100%；出芽率=出芽数/播种数×100%；转化阳性率=转化成功的株数/播种数×100%）。 |
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】解旋；形成相同的黏性末端，便于将目的基因插入到质粒特定部位；稀释涂布平板；琼脂、新霉素；转基因大肠杆菌快速增殖，获得更多的重组质粒（或获得更多的重组质粒）；受精卵；操作简单、直接，不需要经过植物组织培养，转化成功后可直接获得种子；等量的上述不同介质（植物组织培养液（MS）、质量浓度为5%蔗糖溶液、MS+5%蔗糖混合溶液）；人工授粉；用等量不同的农杆菌侵染液涂抹传粉后的月季石榴花柱头
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：28引用：1难度：0.7
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