多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：
（1）若已获取PG的mRNA，可通过逆转录法逆转录法获取PG基因。已知BamHI的识别序列如图2甲所示，请在图2乙相应位置画出目的基因两侧的黏性末端。
。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有卡那霉素卡那霉素的培养基进行筛选，理由是重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏。之后，还需将其置于质量分数为0.3g/ml的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生质壁分离是否发生质壁分离现象来鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与天然的PG基因转录的mRNA天然的PG基因转录的mRNA互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若番茄果实的保质期延长番茄果实的保质期延长，则可确定转基因番茄培育成功。
（4）将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用植物组织培养植物组织培养技术；其中，愈伤组织经再分化再分化形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素植物激素。
（5）某地开展以转基因番茄种植为核心的生态农业建设，利用其秸秆发酵制酒，酒糟喂牛，牛粪和一些番茄的叶片等做沼气池的原料，沼气用于燃烧，沼渣肥田提高番茄产量，该生态系统主要利用的生态农业原理有物质循环再生、能量多级利用物质循环再生、能量多级利用。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录法；；卡那霉素；重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏；是否发生质壁分离；天然的PG基因转录的mRNA；番茄果实的保质期延长；植物组织培养；再分化；植物激素；物质循环再生、能量多级利用
；卡那霉素；重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏；是否发生质壁分离；天然的PG基因转录的mRNA；番茄果实的保质期延长；植物组织培养；再分化；植物激素；物质循环再生、能量多级利用【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：18引用：4难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
