DDX5基因在细胞周期调控、肿瘤发生等方面发挥重要作用。研究人员运用CRISPR-Cas9基因编辑技术对口蹄疫病毒易感的PK-15细胞株中的DDX5基因进行敲除，为后续研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基础。请据图回答下列问题。
（1）图1中，Ori是 解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）（酶）首先结合的核苷酸序列。构建CRISPR-Cas9表达载体时使用的工具酶主要有 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶。结合对图2中CRISPR-Cas9技术原理的理解，图1表达载体中需要插入两种sgRNA基因，原因是 敲除DDX5基因内部一段碱基时需要有2个切点敲除DDX5基因内部一段碱基时需要有2个切点。
（2）研究中先将CRISPR-Cas9表达载体导入大肠杆菌DH5a,对CRISPR-Cas9表达载体进行扩增。导入后再将菌液利用 （稀释）涂布平板/平板划线（稀释）涂布平板/平板划线法接种到加有 氨苄青霉素氨苄青霉素的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到 PCR反应体系/PCR仪PCR反应体系/PCR仪中进行基因鉴定。因细菌DNA是裸露的可以直接作为PCR模板，且PCR变性阶段的高温可直接杀死细菌释放DNA，故PCR过程中不需要先提取细菌DNA。
（3）取转化的PK15细胞悬液进行有限稀释，再接种到96孔细胞培养板上，一段时间后对各孔内的细胞株进行DDX5蛋白检测，结果如图3（其中β-actin是真核细胞骨架蛋白）。对细胞悬液进行有限稀释的目的是 保证每孔中最多接种一个细胞，以获得单克隆细胞株保证每孔中最多接种一个细胞，以获得单克隆细胞株，细胞培养时CO2培养箱中充入的气体应是 95%的空气和5%CO295%的空气和5%CO2。根据检测结果，敲除DDX5基因的细胞株编号有 1和51和5。
【考点】动物细胞培养的条件与过程．
【答案】解旋酶（解旋酶、DNA聚合酶）；限制酶、DNA连接酶；敲除DDX5基因内部一段碱基时需要有2个切点；（稀释）涂布平板/平板划线；氨苄青霉素；PCR反应体系/PCR仪；保证每孔中最多接种一个细胞，以获得单克隆细胞株；95%的空气和5%CO2；1和5
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：20引用：1难度：0.4
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1．动物细胞培养和植物组织培养是细胞工程的基本技术，下列关于这两项技术的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 1:30:1组卷：29引用：2难度：0.7 -
2．回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题：
（1）几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。在进行基因工程操作时，可以从植物体中提取几丁质酶的mRNA，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是。若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。
（2）为了提高动物成纤维细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基、添加牛血清、以支持生长等措施。当第一个卡氏瓶中的细胞浓度不再增加时，若要细胞继续增殖，可采用的方法是。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是。
（3）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素促使超数排卵
B．若在囊胚期进行胚胎分割，内细胞团均等分割，滋养成则不必
C．可以从雌性动物体内卵泡处吸取卵泡液，取出卵母细胞进一步培养成熟
D．胚胎成纤维细胞可以用于胚胎干细胞的培养，因为其能分泌抑制细胞分化的物质。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：4引用：1难度：0.7 -
3．据国际糖尿病联盟最新数据，2021年全球约5.37亿成人患有糖尿病，670万成人因糖尿病或其并发症死亡。如图是研究人员提出的治疗方案，请回答下列问题：
（1）从患者体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为。一般来说，动物细胞培养需要的条件有（少答出两点）。
（2）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是。目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素β链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对进行定向改造。
A.胰岛素
B.胰岛素mRNA
C.胰岛素基因
D.胰岛
（3）欲检测胰岛类似细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，可设计如下实验：将等量的胰岛类似细胞与正常胰岛B细胞分别加入两组相等浓度的培养液中，适宜且相同条件下进行培养，一段时间后分别检测两组培养液中。
（4）该治疗糖尿病的方法与异体移植相比，突出的优点是。发布：2024/12/31 2:30:2组卷：35引用：2难度：0.6
