用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。
回答下列问题：
（1）常用的DNA连接酶有E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。上图中 EcoRI、PstIEcoRI、PstI酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA连接酶连接。上图中 EcoRI、PstI、SmaI和EcoRVEcoRI、PstI、SmaI和EcoRV酶切割后的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接。
（2）DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是 磷酸二酯键磷酸二酯键。
（3）DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征，如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能 自我复制自我复制；质粒DNA分子上有 一至多个限制酶切位点一至多个限制酶切位点，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是 用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞。
图甲是含有目的基因的外源DNA片段，图乙是用于将目的基因导入受体细胞的质粒（阴影部分表示抗生素抗性基因），相关限制酶作用部位如图，现想培养转基因抗病植株
（4）在基因工程操作中，不宜选用Sma1，原因是其会破坏 目的基因目的基因和 标记基因标记基因。
（5）在基因工程操作中，不宜选用EcoRⅠ，原因是用其切割外源DNA片段后，不能将目的基因切割下来不能将目的基因切割下来。
（6）为避免目的基因和质粒的自身环化以及目的基因的反向连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，例如可以选用 EcoR1EcoR1和 Pst1Pst1这两种酶。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】EcoRI、PstI；EcoRI、PstI、SmaI和EcoRV；磷酸二酯键；自我复制；一至多个限制酶切位点；用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞；目的基因；标记基因；不能将目的基因切割下来；EcoR1；Pst1
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：16引用：1难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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