植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构，主要原因是农杆菌的Ti质粒中含有生长素合成基因（A）、细胞分裂素合成基因（B）。黄萎病是危害棉花种植的常见疾病，科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因导入棉花，获得抗黄萎病棉花。如图为农杆菌Ti质粒的T-DNA区段结构示意图。据图回答问题：
（1）构建重组Ti质粒时，需要用两种不同的限制酶切割目的基因和Ti质粒，目的是 防止目的基因和质粒自身环化，防止反向连接防止目的基因和质粒自身环化，防止反向连接。通过农杆菌的侵染将重组DNA分子转入棉花细胞中，影响转化效率的因素除了温度、培养时间等环境因素外还有 农杆菌的种类、农杆菌的数量、棉花细胞的生理状态、棉花细胞的对农杆菌的敏感性等农杆菌的种类、农杆菌的数量、棉花细胞的生理状态、棉花细胞的对农杆菌的敏感性等。（答出2点即可）
（2）为防止农杆菌侵染植物细胞后使植物产生瘤状结构，必须把T-DNA片段上的基因 A、BA、B（用字母表示）敲除或替换掉。
（3）成功得到导入目的基因的棉花后可用植物组织培养快速繁殖，植物组织培养的方式之一是胚性细胞经过卵裂、分化、器官发生器官发生和形态建成而发育成胚。从分子水平上检测目的基因转录是否成功的方法是 核酸分子杂交技术检测是否转录出特定RNA核酸分子杂交技术检测是否转录出特定RNA。
（4）棉花植株在多次继代培养后可能会丧失细胞全能性的表达能力，可能是由于细胞或组织中的 激素平衡激素平衡被打破，或细胞对 外源生长物质外源生长物质的敏感性发生改变。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】防止目的基因和质粒自身环化，防止反向连接；农杆菌的种类、农杆菌的数量、棉花细胞的生理状态、棉花细胞的对农杆菌的敏感性等；A、B；器官发生；核酸分子杂交技术检测是否转录出特定RNA；激素平衡；外源生长物质
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：16引用：1难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
