为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图1所示。
（1）利用PCR扩增LEA基因时，需要在引物的 5′端5′端（填“3′端”或“5′端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶是 EcoRⅤ和XbaⅠEcoRⅤ和XbaⅠ，选择上述酶的依据是 Luc中存在BamHⅠ识别序列，BamHⅠ会将Luc切断；一种酶切会导致载体、LEA自身环化及LEA反向连接Luc中存在BamHⅠ识别序列，BamHⅠ会将Luc切断；一种酶切会导致载体、LEA自身环化及LEA反向连接。
（2）为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为 5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'，扩增 44代后会得到等长的8条DNA片段。
（3）乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如图2。
①在分子水平上，用 抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是 干旱胁迫的环境下，LEA通过促进AC的表达使植物油脂增加；VOC通过抑制ATGL的表达减弱油脂的降低干旱胁迫的环境下，LEA通过促进AC的表达使植物油脂增加；VOC通过抑制ATGL的表达减弱油脂的降低。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】5′端；EcoRⅤ和XbaⅠ；Luc中存在BamHⅠ识别序列，BamHⅠ会将Luc切断；一种酶切会导致载体、LEA自身环化及LEA反向连接；5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'；4；抗原-抗体杂交；干旱胁迫的环境下，LEA通过促进AC的表达使植物油脂增加；VOC通过抑制ATGL的表达减弱油脂的降低
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：45引用：4难度：0.4
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