图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tetr）和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。请回答下列问题：
（1）EcoR V酶切位点为
，EcoR V酶切出来的线性载体P1为平平末端。
（2）用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为胸腺嘧啶（T）胸腺嘧啶（T）的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在DNA连接DNA连接酶作用下，形成重组质粒P3。
（3）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“-”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是BB（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是A类菌落含有P0A类菌落含有P0、C类菌落未转入质粒C类菌落未转入质粒。
|
A | B | C |
| 无抗生素 | + | + | + |
| 氨苄青霉素 | + | + | - |
| 四环素 | + | - | - |
| 氨苄青霉素+四环素 | + | - | - |
乙丙
乙丙
。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是目的基因反向连接
目的基因反向连接
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】平；胸腺嘧啶（T）；DNA连接；B；A类菌落含有P0；C类菌落未转入质粒；乙丙；目的基因反向连接
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/23 20:38:36组卷：539引用：11难度：0.6
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